[发明专利]生产等电点高于8或低于5的多肽的方法有效
| 申请号： | 99809946.5 | 申请日： | 1999-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN1313896A | 公开（公告）日： | 2001-09-19 |
| 发明（设计）人： | N·斯蒂芬·波利特;道格拉斯·I·巴克利;皮特·A·斯塔西斯;塔伊玛·E·哈特曼;钟紫阳 | 申请（专利权）人： | 赛欧斯公司 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/62;C07K1/18;C07K1/12 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 | 代理人： | 胡交宇 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种生产等电点高于8或低于5的多肽的方法,其中肽作为融合蛋白被表达,在该融合蛋白中肽通过一个酸裂解位点与一个融合配偶体连接。在无离液剂存在的情况下肽通过酸裂解与融合配偶体分离。该融合配偶体及其可能存在的酸裂解产物与所需的肽具有足够的净电荷差,使肽可通过离子交换层析被分离。 | ||
| 搜索关键词： | 生产 高于 低于 多肽 方法 | ||
【主权项】：
1．一种生产等电点高于8或低于5的纯化的多肽的方法，包括：(A)在一种重组宿主细胞中以一种融合蛋白的形式表达所述的肽，其中，所需的肽在其N-末端与一种融合配偶体融合，该融合配偶体在其C-末端包括具有Asp残基的氨基酸序列，其中(Ⅰ)该融合配偶体的C端Asp残基和该肽的N端残基形成一个在酸性条件下可断裂的键；(Ⅱ)该肽与融合配偶体、任何经酸裂解融合配偶体所产生的不需要的片段之间具有足够的净电荷差别，使该肽能够通过离子交换层析从融合配偶体和任何融合蛋白的不需要的酸裂解片段中分离出来；(Ⅲ)该融合蛋白在重组宿主细胞中形成包含体；(B)从重组宿主细胞中回收包含体；(C)在无离液剂情况下将融合蛋白置于酸性条件，将肽与融合配偶体之间进行裂解；(D)用一种非离子型的离液剂对不溶性的裂解产物进行溶解化处理，所使用的条件是使其变得可溶但又不破坏肽的一级结构；(E)用离子交换层析分离肽。
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