[发明专利]单克隆抗体双段和单段的制备方法

摘要

单克隆抗体双段和单段的制备方法。涉及生物技术工程，其主要技术路线是：粗提抗体→酶切→二次纯化→冻干，制备的F(ab’)₂、Fab的纯度可大于98％，回收率大于50％，且可有效去除热原质，核酸、病毒等杂质，在安全、有效、稳定、一致性上，均达到中国药品生物制品鉴定所人用鼠源性单抗质量标准。

主权项

1.单克隆抗体双段和单段的制备方法，其特征是：单克隆抗体腹水，用50％的饱和硫酸胺粗提二次，抗体蛋白沉淀物用0.1M柠檬酸缓冲液(PH3.5)充分溶解后，调正浓度为10-20mg/ml，再离心去除不溶物；F(ab’)2制备用胃蛋白酶与IgG酶切比例为1∶100，37℃反应2-3h，用3M Tris调正PH7左右，以终止反应；Fab用木瓜蛋白酶，酶与IgG的比例1∶100，37℃反应1-2h，0.25％(W/V)碘乙酰胺终止反应；HPLC疏水液相色谱法纯化F(ab’)2，Fab片段抗体，用Phenyl Sepharose High Performance疏水色谱柱(Pharmacia)分二次纯化：一次纯化A液为1～1.4M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，B液为0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液；二次纯化A液用0.7～1.0M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，B液为0.05M PH5.0醋酸钠缓冲液，线性梯度洗脱时间30-40分钟；纯化后立即冻干，加10％低分子右旋糖酐做复性剂。