[发明专利]一种用于测定人Ⅲ型前胶原的试剂盒及其测定方法

摘要

本发明涉及从人工流产胎皮中提取、纯化人Ⅲ型前胶原，用此抗原制备了高效价抗血清，并以125Ｉ进行标记，建立了血清Ⅲ型前胶原（原ＰＣⅢ）放射免疫分析法。用本法测定了８５２例病人和正常人血清Ⅲ型前胶原含量，结果肝硬化和慢性活动性肝炎升高最为显著；肝活检的纤维化程度与血清Ⅲ型前胶原水平呈密切正相关（ｒ＝０．９８４；Ｐ〈０．００１）。本发明的测定方法对肝纤维化和早期肝硬化有很高的诊断价值。

主权项

1．一种用于放射免疫法测定人Ⅲ型前胶原的试剂盒，包括纯抗原试剂、抗体试剂、标记抗原试剂和分离剂；其特征在于：纯抗原试剂为人Ⅲ型前胶原hPCⅢ，抗体试剂为人Ⅲ型前胶原抗体anti-hPCⅢ，标记抗原试剂为标记抗原125Ⅰ-hPCⅢ及分离剂；其中：(1)所述纯抗原试剂hPCⅢ按法马西公司蛋白质标准检验达到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯，用电泳考马斯亮兰R250染色呈粉红色，电泳图谱观察为单一区带，经β-巯基乙醇还原后电泳图谱可见两条区带，分别代表肽链Proα1(Ⅲ)和Pαl(Ⅲ)，前者迁移率为0.238，蛋白质分子量为19万，后者的迁移率为0.310，蛋白质分子量为17万；(2)所述抗体试剂anti-hPCⅢ为hPCⅢⅡ免疫家兔获得，其标准工作液用0.1％(w/v)牛血清白蛋白BSA,2％(v/v)正常兔血清及0.1M,pH7.4的磷酸盐缓冲盐水PBS配制；(3)所述标记抗原试剂125Ⅰ-hPCⅢ用1％(w/v)BSA,0.1M,pH7.4的PBS配制成浓度为每100微升液体每分钟γ-射线计数值(cpm/100μl)30000；(4)分离剂为0.1M,pH7.4的PBS配制6％(w/v)聚乙二醇和羊抗兔抗血清为第二抗体获得。