[发明专利]一种RPA-Cas12a一锅法检测系统及其应用

摘要

本发明公开了一种RPA‑Cas12a一锅法快速检测系统及其应用，该系统包括RPA预混液和CRISPR‑Cas12a预混液；CRISPR‑Cas12a预混液包括ssDNA、Cas12a和crRNA；crRNA为基于次优PAM序列设计的能引导Cas12a靶向识别AHPND RPA产物的特异性向导RNA序列。本发明设计了特异性crRNA，降低Cas12a的切割效率，使RPA扩增过程与CRISPR‑Cas12a特异性切割过程同时在一管中反应，避免了两步法中转移RPA扩增产物潜在的污染风险及繁琐步骤，灵敏度高、稳定性好，为水产养殖业提供了高灵敏度、高准确性、稳定性好、简便快捷的AHPND现场检测方法。