[发明专利]7α-羟基类固醇脱氢酶末端改造组合点突变及高效合成熊去氧胆酸中间体在审

专利信息
申请号: 202211627525.9 申请日: 2022-12-16
公开(公告)号: CN115896050A 公开(公告)日: 2023-04-04
发明(设计)人: 张荣珍;柳志永 申请(专利权)人: 江南大学
主分类号: C12N9/04 分类号: C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/19
代理公司: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 代理人: 赵巧娜
地址: 214122 江苏*** 国省代码: 江苏;32
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摘要: 发明公开了7α‑羟基类固醇脱氢酶末端改造组合点突变及高效合成熊去氧胆酸中间体,属于基因工程和生物催化领域。本发明通过将7α‑羟基类固醇脱氢酶N末端氨基酸截短、结合口袋特定的氨基酸定点突变,获得了热稳定性和催化效率显著提高的突变体。最佳组合突变体ΔN53/M196I/I258M/K262T的酶活力提高约323倍,kcat/Km值比野生型提高267.04倍,Tm值提高了21.06℃,野生型催化50mM底物鹅去氧胆酸,反应需要48h,合成产物7‑氧代‑石胆酸的产率为84.4%。而突变体催化50mM底物鹅去氧胆酸,反应仅仅需要4h,合成产物7‑氧代‑石胆酸的产率高达97.1%。
搜索关键词: 羟基 类固醇 脱氢酶 末端 改造 组合 突变 高效 合成 熊去氧 胆酸 中间体
【主权项】:
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