[发明专利]一种基于二代测序技术在属水平实现蓝藻绝对定量的方法在审
| 申请号： | 202011214313.9 | 申请日： | 2020-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN112159856A | 公开（公告）日： | 2021-01-01 |
| 发明（设计）人： | 孙蓓丽;张佩佩;周克茹 | 申请（专利权）人： | 江苏宏众百德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 南京禾易知识产权代理有限公司 32320 | 代理人： | 王彩君 |
| 地址： | 214135 江苏省无锡*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于二代测序技术在属水平实现蓝藻绝对定量的方法，涉及蓝藻绝对定量相关领域，通过向样品中添加人工合成DNA内参，同时对蓝藻门下各属的16S rRNA基因拷贝数进行矫正，从而实现在属水平对蓝藻群体的准确绝对定量，揭示出蓝藻菌群结构的真实变化。包括如下步骤：S1：合成P‑Spikes序列，克隆至质粒pMA‑T，将质粒导入大肠杆菌；S2：将已知量的P‑Spikes加入到环境样品，DNA提取，PCR扩增，反应完成琼脂糖凝胶电泳检测，利用PCR产物纯化试剂盒纯化处理；S3：建库构建，得到环境样品中蓝藻门的45个属的16S rRNA基因拷贝数；S4：对测序结果统计分析，得到P‑Spikes和蓝藻门下各属reads数；S5：利用P‑Spikes和蓝藻门下各属reads数，结合蓝藻门的16S rRNA拷贝数得到蓝藻门下各属绝对丰度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 二代 技术 水平 实现 蓝藻 绝对 定量 方法 | ||
【主权项】：
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