[发明专利]一种藻红蛋白(PE)与Annexin V蛋白偶联方法在审

专利信息
申请号: 202011149769.1 申请日: 2020-10-23
公开(公告)号: CN112745378A 公开(公告)日: 2021-05-04
发明(设计)人: 郭爱龙 申请(专利权)人: 杭州联科生物技术股份有限公司
主分类号: C07K14/47 分类号: C07K14/47;C07K1/10;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/70
代理公司: 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 代理人: 周琼
地址: 310000 浙江省杭州市*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明公开了一种藻红蛋白(PE)与Annexin V蛋白偶联方法,包括以下步骤:步骤1:Annexin V蛋白表达纯化:1.1:基因序列优化:查找人Annexin V蛋白的基因序列,将人Annexin V基因序列优化,去除终止密码子序列,将其连入原核表达载体pET28a上,保留前后His标签蛋白,为蛋白纯化及后续偶联荧光素纯化做准备;1.2:Annexin V蛋白诱导表达:挑取pET28a‑Annexin V质粒单菌落,接种到10ml含有50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中,37℃200rpm振荡培养过夜,按照1:100将培养的菌液接种到含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中,37℃200rpm振荡培养至菌液浓度OD600为04‑0.6;本发明先通过分子筛纯化去除大部分游离的PE后再采用镍柱纯化浓缩,得到纯度较高的Annexin V‑PE标记物,且保持蛋白良好的生物活性,可用于细胞凋亡检测。
搜索关键词: 一种 蛋白 pe annexin 方法
【主权项】:
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