[发明专利]一种简单快速高效的CRISPR/Cas9载体构建方法及应用有效
| 申请号： | 201911205309.3 | 申请日： | 2019-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN110951770B | 公开（公告）日： | 2021-11-30 |
| 发明（设计）人： | 林拥军;黄维峰;周菲 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 王振宇 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供一种简单快速高效的CRISPR/Cas9载体构建方法及应用，包括：构建骨架载体并对骨架载体进行线性化处理得到线性化的骨架载体，制备靶点引物后将所述靶点引物接入所述线性化的骨架载体中得到连接产物，将所述连接产物转接至大肠杆菌后得到阳性CRISPR/Cas9载体；其中，所述骨架载体连接有OsU3启动子或OsU6b启动子、gRNA1及Bsa I酶切位点，所述gRNA1上5’端的碱基5’‑gtttt‑3’被删除；所述靶点引物可包含一个或多个靶点引物片段，并通过粘性末端设计与骨架载体连接。本发明的有益效果是该方法适用于单双靶点CRISPR/Cas9载体的构建；利用Bsa I线性化的载体和酶切回收的外源片段可以长期存放于，用于大量CRISPR/Cas9载体构建。本载体系统构建CRISPR/Cas9降低了外源片段突变概率，可以确保重组质粒测序正确率为100％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 简单 快速 高效 crispr cas9 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
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