[发明专利]一种乙脑病毒SA14-14-2的克隆方法及应用在审
| 申请号： | 201910983991.2 | 申请日： | 2019-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN110656120A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 孙强明;魏春燕;李琳昊;王恒;管娇琼;李代英 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所;中国医学科学院基础医学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/40;A61K39/12;A61P31/14 |
| 代理公司： | 53210 昆明合盛知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 牛林涛 |
| 地址： | 650118 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种乙脑病毒SA14‑14‑2的克隆方法：根据NCBI公布的D90195.1基因序列为参照分别合成6段基因序列，利用同源重组技术通过相应酶切位点将合成序列依次克隆至线性化载体中，获得乙脑病毒SA14‑14‑2的全长克隆。本发明采用同源重组技术，可简单、快速并且高效的将插入片段定向克隆至载体任意位点。仅需将插入片段正/反向引物5’端引入线性化载体的末端序列，使之包含载体的同源臂，后按一定比例混合，在重组酶催化下，37℃反应30min即可完成，极大的节约了连接时间。同时由于独特的非连接酶依赖体系，极大降低了载体自连背景，同时对杂质的耐受度增加，提高了其阳性率并简化了实验步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 同源重组技术 线性化载体 插入片段 乙脑病毒 克隆 定向克隆 反向引物 合成序列 基因序列 末端序列 全长克隆 实验步骤 非连接 耐受度 同源臂 阳性率 重组酶 酶切 位点 催化 合成 基因 节约 引入 | ||
【主权项】：
1.一种乙脑病毒SA14-14-2的克隆方法，其特征在于，根据NCBI公布的D90195.1基因序列为参照分别合成6段基因序列，利用同源重组技术通过相应酶切位点将合成序列依次克隆至线性化载体中，获得乙脑病毒SA14-14-2的全长克隆。/n
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