[发明专利]用于多重核酸鉴定的产品和方法

摘要

本文提供了用于检测多重靶核酸是否存在的产品和方法。某些方法包括扩增所述靶核酸或其部分；延伸与扩增子特异性杂交的寡核苷酸，其中所述延伸的寡核苷酸包括捕获剂；通过所述捕获剂将所述延伸的寡核苷酸捕获至固相；通过用竞争物的竞争释放所述延伸的寡核苷酸；检测所述延伸的寡核苷酸，并且从而通过所述延伸的寡核苷酸是否存在确定每种靶核酸是否存在。

主权项

1.一种使用多重分析检测组合物中多种基因变异体是否存在的方法，所述方法包括：/n(a)制备衍生自多种靶核酸物质或其部分的多个扩增子，其中每种靶核酸物质包括第一变异体和第二变异体，其中所述第一变异体是较低丰度变异而所述第二变异体是较高丰度变异，并且所述较低丰度变异是靶核酸物质的1％或更低；/n(b)将所述扩增子与寡核苷酸物质杂交，其中每个寡核苷酸物质与衍生自靶核酸物质的扩增子杂交，从而产生杂交的寡核苷酸物质；以及/n(c)在延伸条件下，将所述杂交的寡核苷酸物质与包括一种或多种终止核苷酸的延伸组合物接触；其中：/n(i)所述一种或多种终止核苷酸包括捕获剂，所述捕获剂包括生物素；并且/n(ii)与第一变异体杂交的杂交的寡核苷酸物质由终止核苷酸延伸，从而产生延伸的寡核苷酸物质，并且与第二变异体杂交的杂交的寡核苷酸物质没有由终止核苷酸延伸；/n(d)将所述延伸的寡核苷酸物质捕获至固相，所述固相包含(c)中捕获剂的结合伴侣，所述结合伴侣是亲和素或链霉亲和素；/n(e)通过在85℃至95℃的升高的温度条件下使所述固相与竞争物接触从所述固相中释放在(d)中结合到所述固相上的延伸的寡核苷酸物质，其中所述竞争物包括浓度为25至50μg/ml的游离生物素；以及/n(f)通过质谱检测在(e)中从所述固相释放的每个延伸的寡核苷酸的质量；从而检测所述遗传变异体是否存在。/n