[发明专利]一种去泛素化酶的活性检测方法在审
| 申请号： | 201910806260.0 | 申请日： | 2019-08-29 |
| 公开（公告）号： | CN110412004A | 公开（公告）日： | 2019-11-05 |
| 发明（设计）人： | 姚晓晖;苏妙贤;来棽棽;谢志伟;严俊 | 申请（专利权）人： | 苏州新格诺康生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市工业*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种去泛素化酶的活性检测方法，包括以下步骤：S1、将去泛素化酶，底物和反应缓冲液置于冰上解冻，将荧光素检测试剂置于室温，避光；S2、配制含有10mM DTT的1X反应缓冲液，并以含有10mM DTT的1X反应缓冲液分别配制去泛素化酶工作溶液与底物工作溶液；与传统荧光分析法相比，本发明中的化学发光方法表现出更宽的线性范围，更高的灵敏度和更低的检测限，因此能获得更高可靠性的检测数据；在获得同等结果的前提下，通过氨基荧光素标记泛素(Ub‑AML)作为发光底物所需要的酶量，低于传统荧光法所需酶量几百甚至几千倍，从而极大的降低了高通量药物筛选的成本。 | ||
| 搜索关键词： | 泛素 反应缓冲液 传统荧光 工作溶液 活性检测 底物 酶量 配制 高通量药物筛选 氨基 荧光素标记 发光底物 高可靠性 化学发光 检测试剂 检测数据 灵敏度 荧光素 避光 解冻 检测 表现 分析 | ||
【主权项】：
1.一种去泛素化酶的活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将去泛素化酶，底物和反应缓冲液置于冰上解冻，将荧光素检测试剂置于室温，避光；S2、配制含有10mM DTT的1X反应缓冲液，并以含有10mM DTT的1X反应缓冲液分别配制去泛素化酶工作溶液与底物工作溶液；S3、在白色96孔板中，加入以下体积组分以获得20ul的总反应体积的混合液：a‑10ul 1X反应缓冲液；b‑5ul去泛素化酶工作溶液；c‑5ul底物工作溶液；S4、将白色96孔板稍作离心使各组分溶液聚集到孔底充分混匀，将S3所得混合液反应置于室温孵育25‑35分钟；S5、在白色96孔板每孔中加入20ul荧光素检测试剂，然后将白色96孔板置于摇床上摇晃2分钟,之后将白色96孔板置于室温继续孵育30分钟；S6、读盘，记录每孔的发光值。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于苏州新格诺康生物技术有限公司，未经苏州新格诺康生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910806260.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
