[发明专利]一种苹果轮纹病菌的接种方法

摘要

本发明公开了一种苹果轮纹病病菌的接种方法，包括苹果轮纹菌液获得，菌液接种苹果果实，最后接种枝条。其中PDA液体培养基配方为马铃薯200g；葡萄糖20g；蒸馏水1000mL。本发明的有益效果是能够补充或者替代目前多数研究中用菌饼接种苹果轮纹病的方法，可以大量而且准确地接种，具有简单、高效的特点。

主权项

1.一种苹果轮纹病病菌的接种方法，其特征在于按照以下步骤进行：步骤1：苹果轮纹菌液获得：在超净工作台中，取PDA液体培养加入高温灭菌的三角瓶中，用无菌的尖头小镊从平板上培养的苹果轮纹病菌上挑取少许菌丝，放入三角瓶中，用封口膜封好，置于摇床中培养，苹果轮纹病菌菌丝产生菌丝球状物；在超净工作台中，取PDA液体培养基加入离心管，再从三角瓶中培养物中夹取两三个菌丝球状物放入离心管中；取一大烧杯，加满冰块，将上述离心管插入冰块中并固定于烧杯中；将烧杯放入超声波细胞细胞破碎仪的隔音箱中，用酒精棉球擦洗探头，将探头没过液体，将菌丝球状物破碎为乳液状；步骤2：菌液接种苹果果实：选取大小一致、无损伤的富士苹果果实，将果实用酒精擦拭进行表面消毒，然后用无菌水冲洗，室温风干；在赤道处相对位置用打孔器打上两个孔，用移液枪吸取破碎的菌液加入一个孔中，另一个孔中加入等量PDA液体培养基做对照；将处理和对照分别用保鲜膜缠好，装入纸箱中培养，观察发病情况；步骤3：接种枝条：选取枝条嫩梢，洗净后用酒精消毒，无菌水冲洗，在枝条上用尖头小镍将嫩梢刺伤；吸取破碎的菌液加入嫩梢的一个刺伤部位；在另一个伤口处，加入液体PDA培养基作对照，将处理和对照用保鲜膜缠好，嫩梢底部用脱脂棉包住，然后在脱脂棉上加入无菌水；放入托盘中，将托盘用保鲜膜覆盖培养，观察发病情况。