[发明专利]一种维氏气单胞菌总RNA提取方法在审
| 申请号： | 201910718808.6 | 申请日： | 2019-08-05 |
| 公开（公告）号： | CN110468124A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 刘柱;盛强龙;唐燕琼;李宏;马香;孙愉宸 | 申请（专利权）人： | 海南大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 11301 北京汇智英财专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 郑玉洁<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 570228 海*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种维氏气单胞菌总RNA提取方法，包括如下步骤：取处于对数生长期的维氏气单胞菌，离心，弃掉培养基，加溶菌酶，振荡均匀，其中，溶菌酶的添加量为300μL，溶菌酶的浓度介于3‑12mg/mL；加入900μL的Bμffer Rlysis‑B溶液，室温放置3分钟；加入200μL的氯仿，充分混匀，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，取上清液；加入上清液体积1/3的无水乙醇，充分混匀，室温静置3分钟或在‑20摄氏度下放置30min后，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，小心倒掉上清液；以为700μL、浓度为75%的乙醇溶液洗涤沉淀，离心，小心倒掉上清液；室温倒置离心管，尽可能使残存的乙醇彻底挥发，加入30‑50μL DEPC水溶解沉淀，立即使用或‑70摄氏度长期保存。 | ||
| 搜索关键词： | 溶菌酶 气单胞菌 上清液 混匀 沉淀 对数生长期 总RNA提取 取上清液 室温放置 室温静置 无水乙醇 乙醇溶液 培养基 倒置 离心管 添加量 乙醇 振荡 挥发 氯仿 洗涤 溶解 下放 | ||
【主权项】：
1.一种维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤S1：取处于对数生长期的维氏气单胞菌，8000rpm、4摄氏度离心1分钟，弃掉培养基，加预定量溶菌酶，振荡均匀，其中，针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，获取菌液500μL，针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，获取菌液1-1.5mL；溶菌酶的添加量介于250-350μL，溶菌酶的浓度介于3-12mg/mL；/n步骤S2：向步骤S1所得溶液中加入800-1000μL的Bμffer Rlysis-B溶液振荡均匀，室温放置3分钟；/n步骤S3：向步骤S2所获得的裂解液中加入150-250μL的氯仿，充分混匀，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，取上清液；/n步骤S4：向上清液中加入其1/3体积的无水乙醇，充分混匀，室温静置3分钟或在-20摄氏度下放置30min后，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，小心倒掉上清液；/n步骤S5：以体积介于600-800μL、浓度介于70-80%的乙醇溶液洗涤沉淀，12000rpm、4摄氏度离心3分钟，小心倒掉上清液，重复此步骤1-2次；/n步骤S6：室温倒置离心管，尽可能使残存的乙醇彻底挥发，加入30-50μL DEPC水溶解沉淀，立即使用或-70摄氏度长期保存。/n
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