[发明专利]一种维氏气单胞菌总RNA提取方法

权利要求书

1.一种维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1：取处于对数生长期的维氏气单胞菌，8000rpm、4摄氏度离心1分钟，弃掉培养基，加预定量溶菌酶，振荡均匀，其中，针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，获取菌液500μL，针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，获取菌液1-1.5mL；溶菌酶的添加量介于250-350μL，溶菌酶的浓度介于3-12mg/mL；

步骤S2：向步骤S1所得溶液中加入800-1000μL的Bμffer Rlysis-B溶液振荡均匀，室温放置3分钟；

步骤S3：向步骤S2所获得的裂解液中加入150-250μL的氯仿，充分混匀，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，取上清液；

步骤S4：向上清液中加入其1/3体积的无水乙醇，充分混匀，室温静置3分钟或在-20摄氏度下放置30min后，12000rpm、4摄氏度离心5分钟，小心倒掉上清液；

步骤S5：以体积介于600-800μL、浓度介于70-80%的乙醇溶液洗涤沉淀，12000rpm、4摄氏度离心3分钟，小心倒掉上清液，重复此步骤1-2次；

步骤S6：室温倒置离心管，尽可能使残存的乙醇彻底挥发，加入30-50μL DEPC水溶解沉淀，立即使用或-70摄氏度长期保存。

2.如权利要求1所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，所述步骤S1还包括，在添加溶菌酶溶解后，另外加入10-20μL乙酸钠及30-60μL 10%SDS溶液。

3.如权利要求2所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，在添加溶菌酶溶解后，另外加入10μL乙酸钠及30μL 10%SDS溶液；针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，在添加溶菌酶溶解后，另外加入20μL乙酸钠及60μL 10%SDS溶液。

4.如权利要求2所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，在添加溶解酶溶解后，所添加的乙酸钠的摩尔浓度为3M。

5.如权利要求1所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，溶菌酶的添加量为300μL；针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，所添加的溶菌酶的浓度介于3-6mg/mL；针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，所添加的溶菌酶的浓度介于9-12mg/mL。

6.如权利要求5所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，所述步骤S1中，针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，所添加的溶菌酶的浓度为5mg/mL；针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，所添加的溶菌酶的浓度为10mg/mL。

7.如权利要求1所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，

所述步骤S2中，添加的Bμffer Rlysis-B溶液体积为900μL；

所述步骤S3中，添加的氯仿溶液体积为200μL；

所述步骤S5中，添加的乙醇溶液体积为700μL，浓度为75%。

8.如权利要求7所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，所述步骤S5中，所添加的乙醇溶液通过用DEPC水配制。

9.如权利要求1所述的维氏气单胞菌总RNA提取方法，其特征在于，所述步骤S4中，针对LB培养基培养的维氏气单胞菌，室温静置3分钟后离心，针对M9培养基培养的维氏气单胞菌，-20摄氏度下放置30min后离心。