[发明专利]一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法

摘要

本发明公开了一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法，包括以下步骤：（1）薏苡小穗选材与预处理；（3）小孢子愈伤诱导；（4）愈伤组织增殖培养；（5）加倍处理与胚性愈伤组织增殖培养；（6）再分化成苗；（7）炼苗移栽；（8）择优进行倍性鉴定，留用适用资源。通过科学的培育方法，精确的培养条件，利用小孢子培养，系统性的、高效性的获得表型稳定的纯合薏苡资源，整个流程用时较短，得到的薏苡资源性状稳定、一致，具有很好的应用价值，能够大幅推动薏苡栽培区域的扩大生产，增加农户收益，前景广阔。

主权项

1.一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）薏苡小穗选材与预处理：薏苡雄花穗抽出2cm，花药长3‑4mm时，采集颖花雄枝梗，用75%酒精灭菌，12℃无菌环境静置24h；（2）花粉分离：无菌操作剥取花药，于6%蔗糖溶液静置10分钟，置于磁力搅拌仪上，低速旋转，使花药中的小孢子释放出来，然后无菌过滤收集，调整到合适的密度，便可用于培养；（3）小孢子愈伤诱导：吸取适量小孢子溶液接种于培养基培养，条件为透气盖组培瓶，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2‑3次；（4）愈伤组织增殖培养：继代2‑3次后，接入培养基培养，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2‑3次；（5）加倍处理与胚性愈伤组织增殖培养：将获得的所有愈伤组织一分为二，一份标注为A纯合体，经N₆＋0.005%秋水仙素培养基培养10d，转接N₆培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，3000lx培养，获得生长致密、易于诱导分化的胚性愈伤组织；另一份标注为B单倍体备份，继代增殖；两份胚性愈伤组织同时进行步骤6、步骤7处理，各级处理A、B水平一致；（6）再分化成苗：生长致密带绿点的胚性愈伤组织转入培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，3000lx进行芽诱导分化培养；待不定芽长到2‑3cm，转接在生根培养基，PH5.8，温度21‑23℃，光照13h，3000lx生根培养；（7）炼苗移栽：苗长到6‑7cm，选根系诱导较好的苗开瓶炼苗5‑7d，多菌灵液蘸根后移栽于基质中，1/8 N₆培养液喷施，逐天减湿炼苗，2周后移到温室内，成活后再移至大田正常栽培管理，收种；（8）择优进行倍性鉴定，留用适用资源：根据A、B两种植株的形态对照及田间形态及经济性状表型比较，择优进行倍性鉴定，留用自A群体获得的优质纯合薏苡资源。