[发明专利]一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法

说明书

本发明公开了一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法，包括以下步骤：（1）薏苡小穗选材与预处理；（3）小孢子愈伤诱导；（4）愈伤组织增殖培养；（5）加倍处理与胚性愈伤组织增殖培养；（6）再分化成苗；（7）炼苗移栽；（8）择优进行倍性鉴定，留用适用资源。通过科学的培育方法，精确的培养条件，利用小孢子培养，系统性的、高效性的获得表型稳定的纯合薏苡资源，整个流程用时较短，得到的薏苡资源性状稳定、一致，具有很好的应用价值，能够大幅推动薏苡栽培区域的扩大生产，增加农户收益，前景广阔。

技术领域

本发明属于植物培育技术领域，尤其涉及一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法。

背景技术

纯合基因型是薏苡表型代际稳定、群体一致的基础，由于薏苡的应用规模较稻麦玉米等禾本科作物禾本科小，资源纯化工作做的较少，当前多地薏苡栽培品种驯化不充分、不系统。薏苡生产主要在偏远地带，常用的资源纯化主要是基于形态与统计差异进行的筛选，籍此获得表型经济性状稳定、群体一致性高的应用资源所用时间周期长，效率较低。本发明通过小孢子培养技术可获得纯合基因型的薏苡资源。

发明内容

本发明目的就是为了弥补已有技术的缺陷，提供一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法。

为了实现上述的目的，本发明提供以下技术方案：

一种通过小孢子培养获得表型稳定的纯合薏苡资源的方法，包括以下步骤：

（1）薏苡小穗选材与预处理：薏苡雄花穗抽出2cm，花药长3-4mm时，采集颖花雄枝梗，用75%酒精灭菌，12℃无菌环境静置24h；

（2）花粉分离：无菌操作剥取花药，于6%蔗糖溶液静置10分钟，置于磁力搅拌仪上，低速旋转，使花药中的小孢子释放出来，然后无菌过滤收集，调整到合适的密度，便可用于培养；

（3）小孢子愈伤诱导：吸取适量小孢子溶液接种于培养基培养，条件为透气盖组培瓶，PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1200lx，出愈后原培养基继代2-3次；

（4）愈伤组织增殖培养：继代2-3次后，接入培养基培养，PH5.8，温度21-23℃，光照13h，1500lx，再次继代培养2-3次；

（5）加倍处理与胚性愈伤组织增殖培养：将获得的所有愈伤组织一分为二，一份标注为A纯合体，经N₆＋0.005%秋水仙素培养基培养10d，转接N₆培养基，PH5.8，温度21-23℃，光照13h，3000lx培养，获得生长致密、易于诱导分化的胚性愈伤组织；另一份标注为B单倍体备份，继代增殖；两份胚性愈伤组织同时进行步骤6、步骤7处理，各级处理A、B水平一致；

（6）再分化成苗：生长致密带绿点的胚性愈伤组织转入培养基，PH5.8，温度21-23℃，光照13h，3000lx进行芽诱导分化培养；待不定芽长到2-3cm，转接在生根培养基，PH5.8，温度21-23℃，光照13h，3000lx生根培养；

（7）炼苗移栽：苗长到6-7cm，选根系诱导较好的苗开瓶炼苗5-7d，多菌灵液蘸根后移栽于基质中，1/8 N₆培养液喷施，逐天减湿炼苗，2周后移到温室内，成活后再移至大田正常栽培管理，收种；

（8）择优进行倍性鉴定，留用适用资源：根据A、B两种植株的形态对照及田间形态及经济性状表型比较，择优进行倍性鉴定，留用自A群体获得的优质纯合薏苡资源。

优选的，所述步骤3中小孢子愈伤诱导所用培养基为：N₆＋2.0mg/L 2，4－D+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白＋1.0mg/L AgNO₃＋60g/L蔗糖。