[发明专利]一种人类HLA基因多态性引物插入或缺失的测序方法在审
| 申请号： | 201910527757.9 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110551803A | 公开（公告）日： | 2019-12-10 |
| 发明（设计）人： | 田瑞;朱灏 | 申请（专利权）人： | 华夏源(上海)细胞基因工程股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 42261 武汉尚齐知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 林霞 |
| 地址： | 201100 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了一种人类HLA基因多态性引物插入或缺失的测序方法，属于HLA基因测序技术领域，一种人类HLA基因多态性引物插入或缺失的测序方法，包括以下步骤：提取DNA，从目标对象上采集空腹外周静脉血液标本，采用DNA提取试剂盒从血液标本中提取基因组DNA，紫外分光光度仪测定DNA浓度和纯度，高温变性，使DNA模板双链解离成DNA单链，本发明通过将PCR扩增技术和荧光标记相结合，在测序过程中以提高DNA的纯度和浓度为首要前提，利用PCR扩增技术和荧光标记的优势，最大程度减小测序过程的产生的困难和缺陷，测序过程灵敏度高、特异性强、操作简便，从而保证了HLA基因测序的灵敏度和精确度,准确获取HLA基因中是否存在插入或缺失的片段。 | ||
| 搜索关键词： | 测序过程 测序 多态性引物 荧光标记 灵敏度 紫外分光光度仪 提取基因组DNA 静脉血液标本 空腹 测序技术 程度减小 高温变性 目标对象 特异性强 血液标本 提取DNA 解离 双链 外周 采集 保证 | ||
【主权项】：
1.一种人类HLA基因多态性引物插入或缺失的测序方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n步骤一：提取DNA，从目标对象上采集空腹外周静脉血液标本5-10mL，采用DNA提取试剂盒从血液标本中提取基因组DNA，紫外分光光度仪测定DNA浓度和纯度，将DNA浓度调整为50-80ng/μL，其浓度调整为1.6-2.0；/n步骤二：高温变性，将上述制得的DNA模板加热至95-100℃，使DNA模板双链解离成DNA单链；然后进行低温退火，将温度降至45-50℃，向其中加入PCR引物，使PCR引物与DNA模板单链的互补序列配对结合；/n步骤三：引物延伸，向上述PCR引物与DNA模板的混合物中加入PCR缓冲液、dNTP、TaqDNA聚合酶、氯化镁溶液、双蒸水和荧光探针，得PCR混合物，此步骤在PCR扩增仪上进行；/n步骤四：PCR产物纯化，向步骤三中的混合物中加入足量磁珠悬浮液，震动混匀，静置5-10min，然后加入洗脱液，将磁珠与PCR产物分离，得到高纯度的PCR产物；/n步骤五：HLA基因检测，在纯化后的产物中加入甲酰胺溶液，混匀离心后，加热至95-100℃，加热时间为3-5分钟，使DNA进行变性，然后在测序仪上进行变性。/n
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