[发明专利]一种含有自体真皮成纤维细胞透明质酸凝胶剂的构建方法

摘要

本发明提供一种含有自体真皮成纤维细胞透明质酸凝胶剂的构建方法，包括将体外扩增的真皮成纤维细胞与凝胶装载进入特殊药用软膏管，使用时凝胶与活细胞将同时敷在患处，凝胶包裹活细胞，延长制剂中的细胞在体外的活性时间。本发明延长活细胞存活时间，真皮成纤维细胞活细胞作为主要药效成分，该细胞在患处皮肤缺损时期，覆盖患处，分泌I型胶原蛋白，促进患处组织真皮细胞和表皮细胞的增殖，促进患处愈合，用于烧伤创伤、大面积植皮、及其他急需大面积皮肤缺损的临床需求，具有低排异、可持续供应等优点。

主权项

1.一种含有自体真皮成纤维细胞透明质酸凝胶剂的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：活细胞原料的提取：S1：自体组织采集：对细胞使用人实施外科手术，采集颈后厚皮组织；S2：自体细胞体外生产纯化：厚皮组织分离出真皮部分，放入培养基增殖，成纤维细胞逐渐从组织中脱离到培养容器中，在容器底部贴壁生长；生产第10～12天，通过显微操作，去除其他表型真皮成纤维细胞，获得单一Bayreuther FI表型的细胞；使用细胞培养基培养细胞，细胞增殖，使用细胞消化酶对真皮成纤维细胞进行分散，收集Bayreuther FI表型细胞的大量克隆，生成细胞原料；S3：细胞质检与放行：检测合格的细胞原料方可放行，进行储存，或进入下一生产工艺操作；S4：细胞体外储存与使用：S4.1：存储：细胞原料通过离心法，将细胞介质置换成含有二甲基亚砜的细胞冻存液，进行低温分装后，通过程序降温的方法，将细胞原料进行冷冻，冷冻后的细胞原料将长期储存在液氮蒸汽中；S4.2：使用：细胞原料直接进入下一步制剂生产，通过重新离心的方式，将细胞介质置换成其他溶液，制备成活细胞皮内注射液；也可以置换成生理盐水溶液，制成中间产品；第二步：制作预装透明质酸凝胶软膏管：S5：制造软膏管包材：软膏管为双层套管，分体制造；S6：制造透明质酸稀凝胶：S6.1：凝胶生产：稀凝胶采用原料药级微生物发酵工艺生产的透明质酸钠，经过溶液重溶方法制作稀凝胶，原料透明质酸凝胶和定量的细胞介质溶液混合搅拌，稀凝胶达到0.2～0.5mg/ml浓度，备用于灌装工艺；S6.2：稀凝胶质检放行：稀凝胶的质量要求同时符合制剂学要求和细胞介质要求；S7：凝胶罐装：通过软膏剂灌装设备，灌装进入软膏管夹层内，预灌装软膏管密封并保持无菌状态，在2℃～8℃冷库中储存备用；第三步：活细胞原料装载入预装稀凝胶软膏管中形成成品；第四步：产品储存。