[发明专利]一种基于索烃化的蛋白质偶联方法有效
申请号: | 201910504698.3 | 申请日: | 2019-06-12 |
公开(公告)号: | CN110272913B | 公开(公告)日: | 2020-11-03 |
发明(设计)人: | 张文彬;达晓娣 | 申请(专利权)人: | 北京大学 |
主分类号: | C12N15/62 | 分类号: | C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
代理公司: | 北京万象新悦知识产权代理有限公司 11360 | 代理人: | 李稚婷 |
地址: | 100871*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明公布了一种基于索烃化的蛋白质偶联方法。本发明将SpyTag‑SpyCatcher复合物中各二级组分(SpyTag,BDTag和SpyStapler)进行重新连线,引入人工设计的链缠结结构,发展了结合缠绕和催化的蛋白质活性模板方法,可实现不同目标蛋白质以索烃形式连接的机械键偶联。利用该方法对无序蛋白质或折叠蛋白质进行异质索烃化,均不会明显影响蛋白质的结构和性能。该索烃化过程还可通过共表达体系实现细胞内直接表达制备。由于索烃结构对目标蛋白质具有构象限制作用和空间控制,它可提升目标蛋白质的稳定性。本发明实现了蛋白质异质索烃的简洁合成,是一种非常有价值的新型蛋白质偶联策略。 | ||
搜索关键词: | 一种 基于 索烃 蛋白质 方法 | ||
【主权项】:
1.一种基于索烃化的蛋白质偶联方法,包括以下步骤:1)设计蛋白质索烃反应的两个前驱体序列,分别是环状的SpyStapler‑目标蛋白1的融合蛋白序列,以及线性的BDTag‑目标蛋白2‑SpyTag融合蛋白序列;2)构建步骤1)所述两个前驱体序列对应的编码基因,并引入载体质粒;3)利用细胞表达步骤2)构建的基因;4)对表达蛋白进行纯化,得到目标蛋白1和目标蛋白2的异质索烃结构。
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