[发明专利]基于重叠延伸PCR的抗结核药物耐药性检测方法

摘要

本发明涉及一种基于重叠延伸PCR的抗结核药物耐药性检测方法，采用重叠延伸PCR法，在单管中将rpoB、embB、katG基因和inhA启动子的四个耐药相关片段连接扩增为一个约700bp长的融合片段，并只需一次测序反应得到四个片段的耐药突变信息，从而获知某结核分枝杆菌对三种一线抗结核药的耐药情况。该方法在临床上推广应用将极大地降低检测成本，减轻患者经济负担并产生良好的社会效益。简单来说，利用单管PCR扩增rpoB‑embB‑katG‑inhA融合片段进行测序从而检测抗结核一线三种药物耐药情况的方法，为临床耐药结核的检测减轻经济负担并提高检测准确性，方法简便，准确，成本低。

主权项

1.检测引物，其特征在于，包括以结核分枝杆菌标准株H37Rv的DNA序列为模板，设计rpoB、embB、katG基因和inhA启动子四个包含常见耐药突变位点的片段PCR引物，具体如下：rpobF：5'‑GTACGGTCGGCGAGCTGATCCA‑3'，如SEQ ID NO.1所示；rpobR：5'‑CACCGGGTGCACGTCGCGGACCTCCAGCCCGGCACGCTCACGTGACAGAC‑3'，如SEQ ID NO.2所示；embF：5'‑GGAGGTCCGCGACGTGCACCCGGTGATATTCGGCTTCCTGCTC‑3'，如SEQ ID NO.3所示；embR：5'‑ACGGAAGGGATCCTCCGGGCTGCCGAACCAGCGGAAATAGTTGGA‑3'，如SEQ ID NO.4所示；katF：5'‑CGGCAGCCCGGAGGATCCCTTCCGTATGGCACCGGAACCGGTAA‑3'，如SEQ ID NO.5所示；katR：5'‑ACGCAAGCGCCAGCAGGGCTCTTCGTCAGCTCCCACTCGTAGCCGTACA‑3'，如SEQ ID NO.6所示；inhF：5'‑GACGAAGAGCCCTGCTGGCGCTTGCGTAACCCCAGTGCGAAAGTTCCCG‑3'，如SEQ ID NO.7所示；inhR：5'‑GGACTGAACGGGATACGAATGG‑3'，如SEQ ID NO.8所示。