[发明专利]一种苦苣菜组织培养的方法

摘要

本发明公开了一种苦苣菜组织培养的方法，涉及组织培养技术领域。本发明包括无菌苗获得，愈伤组织的诱导培养，愈伤组织的分化培养，生长芽生根培养，试管苗移栽、定植，本发明在愈伤组织的分化培养中的10种培养基上均附加琼脂7～10g/L^‑1，白砂糖15～25g/L^‑1，壳聚糖为0.5～2g/L^‑1，黄瓜汁为100～300g/L^‑1和活性炭为I～3g/L^‑1，能够调节苦苣菜根、茎、叶的生长发育，显著提高叶片的叶绿素含量，提高可溶性蛋白质和可溶性糖的含量，使植株起苗快、长势旺、植株高且健壮、叶长且展开叶片多，能够加快苦苣菜的新陈代谢速度，因而具有壮苗促长的效果，能够在平均叶长以及芽平均伸长高度不受影响的前提下降低了培养基的制备成本，能够为植株提供养分、水分，并能起到透气的效用。

主权项

1.一种苦苣菜组织培养的方法，其特征在于：包括以下步骤：SS01 无菌苗获得：从山林草地上的野生苦苣菜上采收籽粒饱满的苦苣菜种子，放到磨口广口瓶中，用蒸馏水洗涤4次，再用70％乙醇灭菌25s，迅速用无菌水洗涤2次，接着用0.05％二氯化汞灭菌15min，最后用无菌水振荡洗涤6次，获得无菌种子，将无菌种子接种到装有无菌炉灰渣的培养瓶中，瓶中炉灰渣是经过筛、洗涤、烘干，直径约0.2～0.3cm的颗粒状炉灰渣.将颗粒状炉灰清装瓶后，用1/2MS培养基完全浸透，并高温高压灭菌，接种时用镊子将无菌种子插入炉灰渣内约0.4cm，每个培养瓶中接种10粒种子，置于温度为25C的条件下进行暗培养，在多数种子开始发芽时，将培养瓶转到光照强度3200Lx、温度25摄氏度的条件下进行光照培养，培养30～35d即可获得生长出2～3片真叶的苦苣菜无菌苗；SS02 愈伤组织的诱导培养：将具有2～3片真叶的苦苣菜无菌苗的根部和上部剪掉，保留具有2片子叶和1片真叶的下胚轴，接种到培养基上，在共27种愈伤组织诱导培养的培养基上，每个培养接种40个下胚轴，重复2次，在25摄氏度条件下进行暗培养(无光照)和光照培养(每天12h光照，光照强度3200Lx)；SS03 愈伤组织的分化培养：取苦苣菜下胚轴诱导培养的愈伤组织，在无菌条件下切成长0.3～0.5cm的愈伤组织块，接种到10种培养基，在25摄氏度条件下光照培养(每天12h光照，光照强度3200Lx)；SS04 生长芽生根培养：将培养55～65d，长势旺盛的生长芽切下，接种到培养基上进行生根培养，每个培养接种40个生长芽，重复2次，在25摄氏度条件下光照培养(每天12h光照，光照强度3200Lx)；SS05 试管苗移栽、定植：试管苗培养到29d时，将培养瓶的瓶塞去掉，在日光温室较强的光照下炼苗4～5d，待培养瓶内的固体培养基表面刚出现菌落时，用镊子把试管苗拔出，洗去附着在根部的培养基后，移栽到上层为约7cm厚鲁糠灰的日光温室苗床上，移裁后的前13d在苗床上面加小拱棚膜以保持湿度80％以上，温度在18～30摄氏度，小拱棚上面加遮阴网防止直射光照，将移裁成活的试管苗，一次性定植到山林旁。