[发明专利]一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法，所述方法步骤如下：1)生产细胞复苏，细胞增殖培养；2)扩增培养；3)加入细胞生长液，细胞使用胰酶进行消化，平行培养；4)细胞表面清洗；5)利用胰酶对于即将接种轮状病毒进行活化；6)将活化的轮状病毒接种到生产细胞，添加培养基培养；7)收获病毒液，离心，取上清液；8)超滤浓缩；9)层析，离子交换；10)甲醛灭活；11)添加氢氧化铝佐剂配制疫苗。

主权项

1.一种灭活轮状病毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)生产细胞复苏，在方瓶、转瓶进行细胞增殖培养；2)将传代的生产细胞从转瓶中消化后，接至生物反应器中，利用微载体进行扩增培养；3)转接之前，将微载体和生物反应器经灭菌后，加入细胞生长液，将反应器调置合适参数运转；3)细胞使用胰酶进行消化，进行逐级放大方式，如10L～40L～70L～150L，或采用10L～40L～70L逐级放大，之后平行3～4个70L进行平行培养；4)接种病毒前对于微载体细胞用无血清培养基通过灌流方式进行细胞表面清洗；5)利用一定浓度的胰酶对于即将接种轮状病毒进行活化；6)将活化的轮状病毒接种到清洗后的生产细胞，孵育吸附后，添加培养基培养；7)培养3‑5d，收获病毒液，反复冻融三次，离心去处微载体，取上清液；8)对上清液进行超滤浓缩；9)利用Core700填料进行层析，之后利用QFF进行离子交换，以达到去除杂蛋白的纯化效果；10)将层析收获液经一定比例甲醛灭活4‑6天后，除去甲醛；11)添加氢氧化铝佐剂配制疫苗。