[发明专利]基于LC-MS/MS前衍生化测定人血浆中利塞膦酸的方法及其应用在审
| 申请号： | 201910422902.7 | 申请日： | 2019-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN110308217A | 公开（公告）日： | 2019-10-08 |
| 发明（设计）人： | 汤宏敏;周信;田晔 | 申请（专利权）人： | 北京九昊医药科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/06 |
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| 地址： | 100176 北京市大兴区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及到基于LC‑MS/MS前衍生化测定人血浆中利塞膦酸的方法。该方法的前衍生化步骤为：取血浆样本150μL，加入5.00μL内标工作液，混匀，加入150μL10％三氯乙酸，振荡3min后，13000rpm离心5min，取上清100μL加57.0μL甲醇‑25％氨水(50∶7，v/v)，振荡3min；然后加入400μL三甲基硅烷基重氮甲烷，1600rpm振荡衍生4h，静置后取下层溶液2.00μL进样。与现有技术相比，本发明通过蛋白沉淀后直接进行衍生化反应，极大程度地简化了利塞膦酸的样本前处理过程，具有运行时间短、选择性好、灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 利塞膦酸 衍生化 振荡 人血浆 三甲基硅烷基重氮甲烷 氨水 衍生化反应 蛋白沉淀 三氯乙酸 血浆样本 工作液 灵敏度 前处理 混匀 甲醇 进样 内标 下层 样本 应用 | ||
【主权项】：
1.一种基于LC‑MS/MS前衍生化测定人血浆中利塞膦酸的方法，其特征在于，具体步骤为：(1)衍生化取血浆样本150μL，加入内标工作液，混匀，加入100‑200μL的8‑12％三氯乙酸，振荡1‑10min后，8000‑20000rpm离心1‑15min，取上清100μL加0.1‑0.7倍量体积的甲醇∶氨水＝50∶7，振荡1‑10min；然后加入200‑600μL三甲基硅烷基重氮甲烷，1000‑5000rpm振荡衍生1‑10h，静置后取下层溶液进样LC‑MS/MS分析；(2)质谱条件离子源为电喷雾电离源；源喷射电压为5000‑6000V；温度为500‑600℃；以N2为离子源气体1，压力为50‑70psi；以N2为离子源气体2，压力为60‑80psi；以N2为气帘气体，压力为20‑30psi；正离子方式检测；去簇电压为60‑80V；扫描方式为多反应监测，碰撞能量均为25‑40eV；用于利塞膦酸衍生化产物及内标利塞膦酸‑D4衍生化产物定量分析的离子反应分别为m/z 354.2→m/z 228.1和m/z 358.2→m/z 232.1；碰撞活化解离为4‑8；扫描时间为40‑60ms。
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