[发明专利]一种基于流式细胞术检测鸡脾脏CD8+

摘要

本发明涉及一种基于流式细胞术检测鸡脾脏CD8+T细胞特异性杀伤作用的方法，包括如下步骤：（1）细菌培养，所述的细菌为鸡白痢沙门菌S06004和S06004ΔspiC；（2）鸡的免疫及采样；（3）靶细胞—巨噬细胞的制备；（4）效应细胞—鸡脾脏CD8+T细胞的制备：包括鸡脾脏淋巴细胞悬液的制备步骤和磁珠分选鸡脾脏CD8+T细胞的步骤；（5）CTL特异性杀伤巨噬细胞。相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明贴壁获得的巨噬细胞（靶细胞）纯度较高，且鸡脾脏CD8+T细胞分选效果明显，分离时间短；以沙门菌宿主细胞—巨噬细胞作为靶细胞，可更精确反映宿主对沙门菌的清除能力；将流式细胞术用于鸡脾脏CD8+T细胞特异性杀伤作用，可在单细胞水平检测鸡脾脏CD8+T细胞的CTL效应。

主权项

1.一种基于流式细胞术检测鸡脾脏CD8⁺T细胞特异性杀伤作用的方法，其特征在于，可以单细胞水平检测鸡CD8⁺T细胞的特异性杀伤作用，包括如下步骤：（1）细菌培养，所述的细菌为鸡白痢沙门菌S06004和S06004ΔspiC；（2）鸡的免疫及采样；（3）靶细胞—巨噬细胞的制备，以分离的原代巨噬细胞作为靶细胞，更接近机体自然状态，提供更准确的结果；（4）效应细胞—鸡脾脏CD8⁺T细胞的制备：包括鸡脾脏淋巴细胞悬液的制备步骤和磁珠分选鸡脾脏CD8⁺T细胞的步骤；（5）CTL特异性杀伤巨噬细胞，通过流式细胞术检测细胞凋亡，可以单细胞水平检测特异性杀伤能力。