[发明专利]一种I群4型禽腺病毒全悬浮的培养方法在审
| 申请号： | 201910400918.8 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110042085A | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 董婷婷;徐宏军;杨碧涛;李义星;张孝智;姜磊;王麒文;肖龙;张敏;高杰 | 申请（专利权）人： | 青岛蔚蓝生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N7/02;C12M3/00;C12M1/34;C12M1/04 |
| 代理公司： | 青岛致嘉知识产权代理事务所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 单虎 |
| 地址： | 266113 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种I群4型禽腺病毒全悬浮的培养方法，属于病毒疫苗技术领域。上述方法包括：步骤1：制苗用细胞的传代与接种；步骤2：制苗用种毒的制备；步骤3：禽腺病毒在生物反应器中的全悬浮培养；步骤4：病毒的收获与效价检测。本申请用生物反应器全悬浮细胞培养技术代替贴壁细胞培养技术制造禽腺病毒灭活疫苗，能实现对禽腺病毒的高效培养，病毒含量比贴壁培养细胞培养高100倍以上，提高半成品质量，进而提升疫苗质量，提高疫苗的安全性和效力。 | ||
| 搜索关键词： | 禽腺病毒 全悬浮 生物反应器 细胞培养 疫苗 病毒 传代 贴壁细胞培养 细胞培养技术 病毒疫苗 高效培养 灭活疫苗 贴壁培养 效价检测 含量比 种毒 半成品 制备 接种 细胞 收获 申请 制造 | ||
【主权项】：
1.一种I群4型禽腺病毒全悬浮的培养方法，其特征在于，包括：步骤1：制苗用细胞的传代与接种将驯化的全悬浮LMH‑s细胞复苏、传代培养后取样计数，用含10％FBS的DMEM生长液将LMH‑s细胞调整为0.5×106个cells/ml，再接种到生物反应器上进行培养；步骤2：制苗用种毒的制备将在生物反应器中培养的LMH‑s细胞接种禽腺病毒，然后加入维持液，接毒后继续培养；接毒后细胞培养一段时间后补加TPCK‑胰酶；在细胞培养48h时取病毒液测定TCID50，之后每隔12h取样检测一次，至接毒后96h，将收获的病毒液进行无菌检验和效力检验，作为生产用种毒；步骤3：禽腺病毒在生物反应器中的全悬浮培养取生长良好的LMH‑s细胞计数后接种到生物反应器中，进行生物反应器全悬浮培养；细胞培养后72h后，按体积比1‑2％接种步骤2的毒种，打入总体积50％的维持液，按步骤2继续培养；步骤4：病毒的收获与效价检测维持液培养后约72h后停止搅拌，此时将培养液全部收获，冻融一次后保存。
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