[发明专利]一种羊膜干细胞提取、培养的方法有效
| 申请号： | 201910400511.5 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110218697B | 公开（公告）日： | 2022-12-16 |
| 发明（设计）人： | 王羽立;杜一飞;卞一峰;严子欣;郝舒姝;刘柯玥;李轩;徐帆 | 申请（专利权）人： | 南京医科大学附属口腔医院 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 邢文月 |
| 地址： | 210029 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种羊膜干细胞提取、培养的方法，通过从胎盘上机械分离后清洗干净的健康羊膜用混合液1浸泡0.5～1h后，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液清洗，用细胞刮轻刮羊膜表面去除上皮细胞，PBS冲洗3～5次，机械剪碎；再将羊膜碎片加入到混合液2中，消化至羊膜碎片基本消失；将羊膜消化悬液1/2X ml叠加在分离液上，1500～2000rpm离心30min，吸取第二层悬液；最后将第二层悬液放在培养基中进行重悬，将悬浮液接种于细胞培养皿后恒温培养。本发明羊膜干细胞提取效率更高、纯度更高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 羊膜 干细胞 提取 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种羊膜干细胞提取、培养的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)将健康羊膜从胎盘上机械分离后进行洗涤以除去血液和残片；(2)将洗涤后的羊膜用混合液1浸泡0.5～1h后，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液清洗，用细胞刮轻刮羊膜表面去除上皮细胞，PBS冲洗3～5次，机械剪碎；其中，所述混合液1为含0.03～0.05％(w/v)十二烷基硫酸钠和0.1～0.5％(w/v)乙二胺四乙酸的三羟甲基氨基甲烷缓冲液；(3)将羊膜碎片加入到混合液2中，消化至羊膜碎片基本消失；其中，所述混合液2为含2～3g/L Ⅱ型胶原酶、0.05～0.1g/L DNase Ⅰ和15％胎牛血清的α‑MEM培养基的混和溶液；(4)将羊膜消化悬液1/2 X ml叠加在分离液上，1500～2000rpm离心30min，吸取第二层悬液；(5)将所述第二层悬液放在培养基中进行重悬，将悬浮液接种于细胞培养皿后恒温培养。
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