[发明专利]一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法

摘要

本发明公开了一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法，特点是具体步骤如下：（1）基于QuEChERS结合载体辅助液液萃取技术通过一次性前处理，实现了对不同类别、不同理化性质的海洋生物毒素的一步式提取和净化工作；（2）混合标准溶液组成和基质标准曲线制备；（3）利用超高效液相色谱‑高分辨质谱仪测定待测样品中11种水产品中海洋生物毒素的浓度；优点是该方法的前处理和仪器分析过程针对不同理化性质的化合物兼容性强，检测效率高，可操作性强，检测限能满足所有受试的目标物并且降低了检测成本。

主权项

1.一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）样品前处理称取液体样品2.00 g于离心管中，加入2 mL 0.1wt%甲酸溶液，涡旋振荡1 min，加入5 mL乙腈，涡旋振荡1 min，超声5 min，以9000 r/min离心5 min，取上清液；残渣加入1 mL0.wt1%甲酸溶液，涡旋振荡1 min，超声5 min，以9000 r/min离心5 min，取上清液；取残渣再加入3 mL乙酸乙酯，涡旋1 min，超声5 min，以9000 r/min离心5 min，取上清液，合并各次离心所得上清液；将合并液体加入0.1 g甲酸铵，涡旋振荡1 min，以9000 r/min离心5 min，得到上层有机相和下层水相；将下层水相倒入到硅藻土柱中，静置15 min以上，下接鸡心瓶，并加入0.5 mL二甲亚砜；在上层有机相中加入500 mg中性氧化铝粉，50 mgC₁₈粉，15 mg石墨化炭黑粉，涡旋振荡一分钟，以9000 r/min离心5 min，取上清液，用乙酸乙酯定容至15 mL，混匀后分多次倒入到硅藻土柱中，后用5 mL甲醇冲洗一次，再用5 mL 由甲醇和氨水按体积比99：1的比例组成的溶液冲洗2次，收集洗脱液在45℃下旋转蒸发至近干，用10 mL甲醇溶剂交换一次，旋转蒸发至近干，用由甲醇和0.1wt%甲酸溶液按体积比1:1组成的溶液定容至2 mL，过0.22 μm尼龙滤膜，供LC‑HRMS检测；（2）混合标准工作液的配制A．混合标准溶液组成：分别吸取河豚毒素、鳍藻毒素、新石房蛤毒素和冈田软海绵酸的单标溶液，用乙腈配制成浓度为100 ng/mL的混合工作液；分别吸取软骨藻酸、柱孢毒素、微囊藻毒素和微囊藻毒素的单标溶液，用乙腈配制成浓度为500 ng/mL的混合工作液；分别吸取脱氨甲酰基石房蛤毒素、膝沟藻毒素和蛤蚌毒素的单标溶液，用乙腈配制成浓度为1000 ng/mL的混合工作液；B．基质标准曲线定量：在空白样品中分别加入上述3种混合标准溶液10 μL，20 μL，40 μL，100 μL，以浓度为横坐标，仪器响应值为纵坐标，做基质加标标准曲线，作为试样处理液中待测物浓度定量的依据；（3）超高效液相色谱‑高分辨质谱联用仪测定A．高效液相分离色谱柱：Hypersile Gold C8色谱柱；流动相A：含有2 mmol甲酸铵和0.1wt%甲酸的水溶液；流动相B：含有2 mmol甲酸铵和0.1wt%甲酸的乙腈‑水溶液，其中乙腈与水的体积比为95:5；流速：0.3 mL/min；进样量：10 μL；HPLC洗脱程序；B．质谱检测离子源：HESI‑II；喷雾电压：采用正离子模式3800V/负离子模式2700V；气化温度：350℃；鞘气压：N₂，35 arb；辅助气压：N₂，10 arb；离子传输管管温度：300℃；质量范围：m/z 100‑2000 ，分辨率R=70000；（4）定量过程：样品中待测物的含量根据如下计算公式（1）得到：X=C*V/m，式中：X－ 试样中待测物含量，单位为μg/kg；C－ 试样处理液中待测物浓度，根据基质标准曲线计算得到，单位为μg/LV— 定容体积，单位为mL；m－试样体积或质量，单位为g。