[发明专利]一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法

说明书

本发明公开了一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法，特点是具体步骤如下：（1）基于QuEChERS结合载体辅助液液萃取技术通过一次性前处理，实现了对不同类别、不同理化性质的海洋生物毒素的一步式提取和净化工作；（2）混合标准溶液组成和基质标准曲线制备；（3）利用超高效液相色谱‑高分辨质谱仪测定待测样品中11种水产品中海洋生物毒素的浓度；优点是该方法的前处理和仪器分析过程针对不同理化性质的化合物兼容性强，检测效率高，可操作性强，检测限能满足所有受试的目标物并且降低了检测成本。

技术领域

本发明涉及一种海洋生物毒素的检测方法，尤其是涉及一种水产品中海洋生物毒素的高通量检测方法。

背景技术

海洋生物毒素是海洋生物体内存在的一类高活性的特殊代谢成分，一般拥有剧烈毒性，主要由藻类或浮游植物产生，通过食物链传递，进入海洋动物体内，可在滤食性的软体贝壳类动物、鱼类等海产品的组织内蓄积，人体一旦过量食入，将引起中毒反应。近年来，有害赤潮在全球范围内频繁爆发，其中部分由产毒藻类引起的赤潮成为海产品生物毒素的重要污染源之一。目前，市售海产品中常见的海洋生物毒素种类包括麻痹性贝毒（Paralytic Shellfish Poisoning，PSP）、腹泻性贝毒（Diarrhetic ShellfishPoisoning，DSP）、记忆缺失性贝毒（Amnesic Shellfish Poisoning，ASP）、神经性贝毒（Neurotoxic Shellfish Poisoning，NSP）及河豚毒素（Tetrodotoxin，TTX）、西加毒素（Ciguatoxin，CTX）等。可见，贝类、海蟹、海虾和鱼类等海产品已成为海洋生物毒素的污染重灾区。

目前，对于水产品中海洋生物毒素检测方法主要分为生物学测试方法和化学分析法，早期应用广泛且较为成熟的有小鼠测试法、免疫分析法等生物学测试法。气相色谱法、薄层色谱法及液相色谱法等化学分析方法也有一定的报道。近年来，液相色谱-质谱联用技术已逐渐成熟，在食品农兽药残留、污染物监控、非法添加剂、生物毒素等检测领域已得到广泛应用。液质联用技术的高灵敏度和选择性使其逐渐成为水产品中海洋生物毒素检测的首选检测手段。现行有效的国家标准有中，GB 5009.198-2016《食品安全国家标准 贝类中失忆性贝类毒素的测定》，GB 5009.206-2016《食品安全国家标准 水产品中河豚毒素的测定》，GB 5009.212-2016《食品安全国家标准 贝类中腹泻性贝类毒素的测定》，GB5009.213-2016《食品安全国家标准 贝类中麻痹性贝类毒素的测定》，GB 5009.261-2016《食品安全国家标准 贝类中神经性贝类毒素的测定》 ，GB 5009.273-2016《食品安全国家标准 水产品中微囊藻毒素的测定》，GB 5009.274-2016《食品安全国家标准水产品中西加毒素的测定》等标准分别规定了水产品中一种或者一类海洋生物毒素的检测方法。这些方法能精确的测定相应水产品中所规定海洋生物毒素的含量，但检测通量较小，无法同时测定多种或多类物质。

海洋生物毒素根据其理化性能可以分为亲水性和亲脂性，对应的麻痹性贝毒（PSP）、记忆缺失性贝毒（ASP）、河豚毒素（TTX）等属于亲水性毒素；腹泻性贝毒（DSP）、神经性贝毒（NSP）及西加毒素（CTX）等属于亲脂性毒素。对现有公开报道方法进行总结发现，除了对单种物质检测的方法，适用多种物质检测的方法所对应的目标物均属于一类或是同一理化性质的目标物。研究针对复杂的水产品基质，亲水性及亲脂性两类理化性能各异海洋生物毒素在前处理提取，净化及仪器的分析上通过一个方法，实现高通量的检测，具有较大的意义。