[发明专利]一种酮戊二酸的制备方法

摘要

本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种酮戊二酸的制备方法。所提供的方法可以分为三步骤来看，第一步骤为菌种的发酵制备，第二步骤为转化，第三步骤为提取，与现有技术相比，本发明的优点和积极效果在于，本发明提供一种酮戊二酸的制备方法，利用酶催化法，有效的解决了现有化学法和发酵法所存在的技术问题，同时，本发明选择性高、能耗低、副产物少、环境友好且转化率高，适合大规模推广使用。

主权项

1.一种酮戊二酸的制备方法，其特征在于，包括以下有效步骤：a、对酮戊二酸基因工程菌进行高密度诱导发酵培养得到菌体酶，离心分离得到酮戊二酸菌体酶；b、将分离得到的酮戊二酸菌体酶加入到转化罐中，同时，加入过氧化氢酶，35℃保温，400rpm，0.5vvm，罐压0.05Mpa；c、将一水谷氨酸钠用自来水溶解后用蠕动泵流加入转化罐，流加速度为1.5升/小时，期间用1％盐酸控pH在6.5左右；d、待转化结束后，将得到的转化液经过陶滤膜，超滤1000，超滤2500三套膜过滤，将其中的菌体及其他不溶性杂质去除；e、将转化液过滤完成后，将得到的料液放入到钙化釜中，调节搅拌转速至200‑250r/min，缓慢加入氢氧化钙固体，调节pH至3.4‑3.6，当看到大量晶体析出时开始计时析晶1.5h，之后继续调节pH，用氢氧化钙调节pH至3.9‑4.1，pH稳定后继续析晶2h，继续加入氢氧化钙，调节pH为5.4‑5.6，当pH稳定后继续搅拌析晶1.5h，钙化后过滤，收集滤饼；f、将得到的滤饼称重后，加入两倍湿滤饼量的水，开启搅拌，转速200‑250r/min，将其分散开，分散均匀后，快速倒入配制好的15％硫酸，搅拌使其充分反应，调节pH至1.3‑1.4，待PH稳定后保持此PH搅拌反应1h，将酸化液过滤，收集滤液，一倍滤饼量的去离子水分两次洗涤滤饼，第一次的合并至滤液，第二次的用作下一次酸化过滤的一次洗涤水，滤渣收集集中处理；g、酸化后滤液加入0.3％液体量的活性炭，室温下持续搅拌2‑3h进行脱色；h、测量脱色后滤液pH、浓度、质量，过阳离子树脂柱，检测浓液出柱pH、浓度、质量，进阴柱；i、测量过阳柱后滤液pH、浓度、质量，过阴离子树脂柱，检测滤液出柱pH、浓度、质量，进浓缩；j、过柱后的料液进浓缩系统，加热50℃，极限真空，浓缩至波美度为20‑21时停止，后梯度式降温进行结晶操作，温度降至20以下时进行离心操作；k、将离心所得湿品装托盘进烘箱50度烘干，即可得到酮戊二酸。