[发明专利]一种辣木叶肉原生质体及其制备方法有效
| 申请号： | 201910309443.1 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN110106137B | 公开（公告）日： | 2023-02-21 |
| 发明（设计）人： | 林孟飞;贾蕊瑚;张俊杰;任颖;周玮;陈晓阳 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 朱双;刘明星 |
| 地址： | 510642*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种辣木叶肉原生质体及其制备方法。该制备方法以辣木三周龄从茎尖往下数第一分支与第二分支叶片为材料，采用纤维素酶R‑10和果胶酶R‑10进行酶解，先真空抽滤45‑50分钟，再使用30rpm水平摇床避光酶解5‑5.5小时，40μm的细胞筛过滤酶解后产物，并利用密度梯度自沉淀法冰上静置两小时分离原生质体。本发明克服了辣木原生质体小、分离效率低、杂质多等问题，有效建立了辣木叶肉原生质体高效且快速的制备方法。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 叶肉 原生 质体 及其 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种辣木叶肉原生质体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取辣木幼苗从茎尖往下数第一分支与第二分支叶片，在超净工作台中去除叶片两端1.5‑2mm部分，留中间部分叶片切成0.3‑0.4mm条状细丝，并马上将切下的细丝放置在渗透剂中，暗条件下放置；(2)在室温下，用镊子将全部叶片细丝转移到酶解液中，真空抽滤45‑50min，然后置于水平摇床上避光酶解5‑5.5h，往酶解产物中加入预冷的W5溶液，混匀，然后经细胞筛过滤至圆底无菌离心管，冰上静置，待溶液出现明显分层，吸去上清，得到辣木叶肉原生质体。
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