[发明专利]一种适用于猪流行性腹泻病毒培养的仔猪肠道上皮细胞快速制备方法在审
| 申请号： | 201910307643.3 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN109943521A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 沈学怀;潘孝成;赵瑞宏;张丹俊;戴银;胡晓苗;候宏艳;周学利;朱林 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 合肥金安专利事务所(普通合伙企业) 34114 | 代理人： | 金惠贞 |
| 地址： | 230031 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适用于猪流行性腹泻病毒培养的仔猪肠道上皮细胞快速制备方法。包括以下步骤：取新生仔猪小肠肠道，剪成肠断，纵向剖开，用磷酸盐缓冲液反复清洗；刮取肠腔面的肠上皮组织用DMEM/F12不完全培养基分散细胞团，离心清洗细胞；用DMEM/F12完全培养基悬浮细胞，调整细胞团密度，在37℃浓度5%二氧化碳气体条件下培养，得到生长成片细胞团；加入胰酶消化液，进行细胞纯化，纯化过程可反复进行，直至得到生长状态良好的仔猪肠道上皮细胞。本发明通过肠腔面的机械分离和纯化得到生长状态良好的仔猪肠道上皮细胞，所获得的肠道上皮细胞适用于猪流行性腹泻病毒培养，为研究猪流行性腹泻病毒感染对仔猪肠道上皮细胞的细胞和分子机制提供快速的技术方案。 | ||
| 搜索关键词： | 上皮细胞 仔猪肠道 猪流行性腹泻病毒 完全培养基 快速制备 生长状态 细胞团 肠腔 肠道上皮细胞 二氧化碳气体 磷酸盐缓冲液 细胞 胰酶消化液 反复清洗 分散细胞 分子机制 机械分离 离心清洗 上皮组织 细胞纯化 新生仔猪 悬浮细胞 纵向剖开 小肠 肠道 刮取 生长 感染 研究 | ||
【主权项】：
1.一种适用于猪流行性腹泻病毒培养的仔猪肠道上皮细胞快速制备方法，其特征在于操作步骤如下：（1）制备洁净肠断取0日龄未吃初乳的新生仔猪小肠肠道50～60cm，将肠道剪成5～7cm的肠断，去除肠系膜，在磷酸盐缓冲液中将肠断纵向剖开，反复清洗肠断3～5遍，直至清洗液变成清亮，得到洁净肠断；（2）制备接种细胞团在DMEM/F12不完全培养基中，刮取肠断内面的上皮组织，将刮取物用移液枪头反复吹吸分散细胞团，离心收集细胞团，重复清洗3次，既得接种细胞团；（3）细胞培养调整接种细胞团密度为25cm2细胞瓶有150～200个细胞团块，在DMEM/F12完全培养基中培养15～20天，得到生长成片细胞团；（4）细胞纯化在生长成片细胞团中加入胰酶消化，用DMEM/F12完全培养基终止消化反应，用移液枪头轻轻吹打细胞面，并吸除含成纤维细胞的细胞液；利用成纤维细胞与生长成片细胞胰酶消化时间差实现纯化，得到生长状态良好的仔猪肠道上皮细胞。
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