[发明专利]一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法及其检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法及其检测试剂盒，所述检测试剂盒包括检测组试剂盒和对照组试剂盒两种成分，所述检测组试剂盒包括稳定表达人源μ型阿片受体MOR1基因的单克隆细胞系MOR1/SK‑N‑SH和ELISA检测试剂盒，所述对照组试剂盒包括空白对照细胞系Neo/SK‑N‑SH和ELISA检测试剂盒。本发明可实现所有阿片类活性物质的精确、高灵敏的快速检测，无论是天然阿片类产品、还是合成阿片类分子，包括层出不穷的新型合成阿片活性物质，如芬太尼及其各种衍生物，可解决新型合成阿片类精神活性物质监管难的问题。

主权项

1.一种基于细胞多巴胺释放效应的阿片类活性物质的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1）将阿片受体基因克隆到CMV启动子下，构建真核表达质粒；2）将步骤1）真核表达质粒转染到神经母细胞瘤细胞，并建立阿片受体稳转的神经母细胞瘤细胞系，进行培养扩增得到检测组细胞培养液；同时建立一个转染对照空载体的神经母细胞瘤细胞系，进行培养扩增得到对照组细胞培养液；3）步骤2）检测组细胞培养液中加入标准品并充分反应，标准品为吗啡或芬太尼，配制一系列不同标准品浓度的标准液；将标准液离心分离后，取上清液并用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD值，以测得的吸光度OD值为纵坐标，以标准液中的标准品浓度为横坐标绘制标准曲线，计算拟合回归方程；4）步骤2）检测组细胞培养液中加入待测样本，充分反应，离心分离后取上清液，对反应后的检测组细胞培养液的上清液用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD₁值；步骤2）对照组细胞培养液中加入待测样本，充分反应，离心分离后取上清液，对反应后的对照组细胞培养液的上清液用ELISA检测试剂盒检测多巴胺效应下的吸光度OD₂值；计算吸光度OD₁值与吸光度OD₂值之差，并带入步骤3）回归方程，即可推算出待测样本中的阿片类活性物质的效应含量。