[发明专利]牡丹肽-富勒烯的制备方法

摘要

本发明公开一种具有优异的水溶性和生物相容性且可有效提高抗氧化活性及促有丝分裂作用的牡丹肽‑富勒烯的制备方法，以海洋酸性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶配制的复合酶酶解牡丹种子细粉，得到冷冻粉，然后以所得到的冻干粉为原料，加入氨基酸混合物，再利用海洋酸性蛋白酶进行二次酶解，得到二次酶解冻干粉；将二次酶解冻干粉溶于去离子水中，再加入乙醇得到均相溶液；在氮气保护下，将所得到的均相溶液缓慢滴加到C60的甲苯溶液中，搅拌后得到固体产物；将该固体产物用超纯水溶解后用截留分子量3000Da的透析袋在超纯水中进行透析，冷冻干燥得到牡丹肽‑富勒烯。

主权项

1.一种牡丹肽‑富勒烯的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：a. 将牡丹种子粉碎，过筛得牡丹种子细粉，向牡丹种子细粉中加入1~3倍体积pH 4~5的0.01~0.1M磷酸缓冲液得匀浆，再加入与匀浆质量比为0.1~1%的复合酶，在37℃条件下，酶解12~48 h；所述复合酶为海洋酸性蛋白酶：胃蛋白酶：木瓜蛋白酶按活力单位比为6：3：1混合而成；b. 离心取上清，采用截留分子量为3000 Da超滤膜分离器分离，取透过超滤膜的液体，冷冻干燥得冻干粉；c. 向冻干粉中加入氨基酸混合物，再加入1~3倍体积pH 4~5的0.01~0.1M磷酸缓冲液及与冻干粉质量比为0.1~1%的海洋酸性蛋白酶，在37℃条件下，酶解12~48 h，在95℃水浴中灭酶15min，冷却至室温后，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液；所述氨基酸混合物与冻干粉中总游离氨基酸质量之比为0.5；d. 将上清液中加入乙醇，至乙醇体积比70%，在6000rpm条件下离心20min，得到上清液，冷冻干燥得冻干粉；e. 取d步骤得到的冻干粉和NaOH溶于去离子水中，再加入乙醇得到均相溶液，所述冻干粉、NaOH、去离子水及乙醇的用量比为80~200mg：600~2000mg：1~10ml：10~40ml；f. 称取C₆₀溶于甲苯中，所述C₆₀与甲苯的用量比为10~100mg：20~60 ml，在氮气保护下，将均相溶液缓慢滴加到C₆₀的甲苯溶液中，搅拌48h后得到固体产物；e. 将固体产物用超纯水溶解后用截留分子量3000Da的透析袋在超纯水中进行透析，冷冻干燥得到牡丹肽‑富勒烯。