[发明专利]一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法和应用在审
| 申请号： | 201910238620.1 | 申请日： | 2019-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN109837232A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | 韩晓云;王曦冉;孙庆申;郑桂华;李珊珊 | 申请（专利权）人： | 黑龙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/56;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市松花江专利商标事务所 23109 | 代理人： | 岳泉清 |
| 地址： | 150080 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法和应用，它涉及菌株构建以及发酵领域，本发明的目的是为了构建粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株，以提高其降解纤维素的能力，并通过与牛粪混合共发酵玉米芯，实现玉米芯降解效果，本发明首先设计粗糙脉胞菌引物，对NCU07340基因进行克隆，并与qa‑5myc.6His载体进行连接，成功构建载体质粒，将载体转入组氨酸缺陷型菌株4200his－中，Western杂交检验得到cbh‑1其表达蛋白大小约为90KDa。发现cbh‑1基因过表达菌株菌丝生长状态要强于野生菌株。在此基础上，本发明将cbh‑1基因过表达菌株与牛粪共同发酵玉米芯。本发明应用于玉米芯发酵领域。 | ||
| 搜索关键词： | 粗糙脉胞菌 构建 外切葡聚糖酶 突变菌株 玉米芯 菌株 基因过表达 发酵领域 牛粪 降解 应用 组氨酸缺陷型 表达蛋白 发酵玉米 菌丝生长 菌株构建 野生菌株 载体质粒 纤维素 共发酵 引物 克隆 转入 基因 检验 发现 成功 | ||
【主权项】：
1.一种粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建方法，其特征在于它是按照以下步骤进行的：一、cbh‑1基因获得设计引物对，以粗糙脉孢菌的基因序列为模板，进行PCR扩增，对PCR产物进行凝胶电泳，并胶回收目的基因片段；引物1 5'‑ttcatCGATGAATTCATGCTCGCCAAGTTCGCTGC‑3'；引物2 5'‑GGCAAGCTGATCCCCCTCATACGGTGGATGTATTGCC‑3'；二、无缝克隆构建载体对载体进行酶切，得到线性化载体；将步骤一获得的目的基因片段与线性化载体连接，获得无缝克隆构建载体；三、将步骤二得到的无缝克隆构建载体，转化到大肠杆菌感受态细胞内，验证目的基因成功转入大肠杆菌感受态细胞内后，即完成所述的粗糙脉胞菌外切葡聚糖酶突变菌株的构建。
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