[发明专利]一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法

摘要

本发明涉及生物发酵技术领域，尤其是一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法。本发明的一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，通过经大量实验优化的母瓶培养基、摇瓶培养基和补料培养基，在最优发酵条件下培养维生素B12的生产菌株；发酵过程前期的0‑39h内控制温度在一个相对较低的水平，即26‑30℃，从而控制菌种处于合适的生长速率和保持良好的菌形；在发酵过程中后期提高并维持发酵体系温度在一个的相对较高的水平，即30‑34℃，以促进菌体生长、维生素B12合成的启动和积累，进而使发酵结束后，维生素B12发酵单位高达198mg/L，不仅提高了维生素B12的产量和生产效率，而且节约能耗、降低成本。

主权项

1.一种提高脱氮假单胞杆菌产维生素B12的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、母瓶培养过程控制：将活化的脱氮假单胞杆菌二代斜面刮取适量菌体接种于母瓶培养基中，温度控制在27 ‑ 29℃，湿度控制在30 ‑ 60%，培养时间为18 ‑ 24h小时；S2、摇瓶培养过程控制：将符合标准的脱氮假单胞杆菌母瓶培养基在无菌条件下接入摇瓶培养基，接种量为10%，发酵前期（0‑39h）摇床温度控制在26‑30℃；发酵中后期（39‑170h）摇床温度控制在30‑34℃，湿度控制在30 ‑ 60%；培养时间为170h；S3、补料控制：步骤S2的发酵过程中，分别于第3d、4d、5d时检测总糖含量，当总糖含量低于5%进行补料，维持发酵液总糖含量控制在5‑7%，至发酵结束，从发酵液中分离纯化出维生素B12。