[发明专利]一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法

摘要

一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法，属于微生物发酵及食品加工领域，利用生长曲线对本实验室保藏的12株鼠李糖乳杆菌进行区分，严格限定菌株传代时间，对12株菌进行3次传代，使菌株的生长状态稳定，利用自动生长曲线分析仪在600nm波长处测定12株菌在不同碳源条件下的光密度值，连续测定48小时，采用主成分分析法对测得的生长曲线进行分析，综合考虑3种碳源，鉴定方法科学，原理清晰，与现有的核糖体分型技术操作流程相比，本发明操作流程为菌株纯化‑同步‑生长曲线测定‑分析，操作简单，成本较低，建立了快捷可靠的株水平上的鼠李糖乳杆菌区分手段。

主权项

1.一种新型鼠李糖乳杆菌鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法如下：(1)鼠李糖乳杆菌培养利用生长曲线对12株鼠李糖乳杆菌进行区分，无菌条件下，将12株菌的菌粉接种于MRS肉汤培养基，37℃培养24小时，将复苏的菌液在MRS固体培养基上划线纯化；(2)鼠李糖乳杆菌形态观察将纯化的菌落转接至MRS培养基，37℃培养24小时，收集1mL菌液，6000g离心5分钟，用纯净水重悬菌体；吸取10μL至载玻片，固定制片，染色，在光学显微镜100倍油镜下观察菌体形态；(3)鼠李糖乳杆菌生长曲线测定严格限定菌株传代时间，对12株菌进行3次传代，使菌株的生长状态稳定，将活化的菌液按3％的接种量接种到不同碳源的MRS肉汤培养基中，混匀后用移液枪精确吸取300μL至蜂窝培养板，每株菌做三个平行样，然后放入微生物自动生长曲线分析仪，参数设置为37℃培养48h，每隔15min读取一次数据，重复试验5次；(4)鼠李糖乳杆菌生长曲线比较选取所有测定的时间点及其对应的OD_600nm值，利用SIMCA 14.1软件进行分类主成分分析，考察不同菌株之间的生长情况的差异，采用分类PCA的方法对各个菌株所有时间点的OD_600nm值进行处理，将每一株鼠李糖乳杆菌分为一类，共12类，直观考察各组之间的相似和差异情况，样本与所选模型的相似度>0.05，记为“×”，相似度<0.05，记为“√”；(4‑1)葡萄糖作碳源，PCA分类法的比较在葡萄糖作碳源时，PCA分类法的效果较差，151m和hsryfm1301相似度高，BG和F相似度高，Bm01和F、grx19、LV1、SP1相似度高，CRL1505和F相似度高，F和grx19、hsryfm1301、LV1相似度高，grx19和LV1、SP1相似度高，LV1和SP1相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为5个类型；(4‑2)乳糖作碳源，PCA分类法的比较在乳糖作碳源时，Bm01和F、LV1相似度高，F和grx10、grx19、LV1相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为9个类型；(4‑3)蔗糖作碳源，PCA分类法的比较在蔗糖作碳源时，只有151m和hsryfm1301相似度高，BG和grx10相似度高，其它菌株均可区分，将12株菌分为10个类型；(5)鼠李糖乳杆菌菌株的区分葡萄糖是大多数乳酸菌的偏爱碳源，因而葡萄糖对菌株的区分能力不佳，乳糖和蔗糖的区分能力较好，综合三种碳源下，在试验进行的12株鼠李糖乳杆菌菌株中，均可利用生长曲线数据进行区分。