[发明专利]外周血成熟DC细胞外泌体制备方法在审
| 申请号： | 201910045818.8 | 申请日： | 2019-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN109679907A | 公开（公告）日： | 2019-04-26 |
| 发明（设计）人： | 施琳 | 申请（专利权）人： | 汇麟生物科技（北京）有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0784 | 分类号： | C12N5/0784 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 陈治位 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区亦庄镇北京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种外周血成熟DC细胞外泌体制备方法，包括：1)将从外周血中分离得到的PBMC细胞使用培养基A培养，得到离体成熟树突状细胞；2)将所述离体未成熟树突状细胞在培养基B中培养后，将培养液低温离心以去除死细胞和碎片，过滤去除囊泡；得到的液体进行超速离心，弃上清，得到成熟DC细胞外泌体；其中，所述培养基A在AIM‑V培养基的基础上额外添加自体血浆、GM‑CSF、IL‑4；所述培养基B在AIM‑V培养基的基础上额外添加无外泌体自体血浆，TNF‑α以及PEG‑2。该方法简便易行，不仅能够提高成熟树突状细胞的比例，还能获得更好的外泌体收率。 | ||
| 搜索关键词： | 培养基 外周血 成熟树突状细胞 自体血浆 离体 去除 培养液 成熟 未成熟树突状细胞 超速离心 低温离心 死细胞 囊泡 收率 过滤 | ||
【主权项】：
1.一种外周血成熟DC细胞外泌体制备方法，其特征在于，包括：1)将从外周血中分离得到的PBMC细胞使用培养基A培养，得到离体成熟树突状细胞；2)将所述离体未成熟树突状细胞在培养基B中培养后，将培养液低温离心以去除死细胞和碎片，过滤去除囊泡；得到的液体进行超速离心，弃上清，得到成熟DC细胞外泌体；其中，所述培养基A为额外添加包括下列成分的AIM‑V培养基：0.8～1.2v/v％自体血浆、GM‑CSF 40～60ng/mL、IL‑4 40～60ng/mL；所述培养基B为在所述培养基A的基础上将自体血浆替换为无外泌体自体血浆，并额外添加TNF‑α7～13ng/mL以及PEG‑2 0.8～1.2μg/mL。
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