[发明专利]一种用于游离DNA亚硫酸氢盐转化的试剂盒

摘要

本发明公开了一种用于游离DNA亚硫酸氢盐转化的试剂盒，包括亚硫酸氢盐溶液、保护液、洗液A、磁珠悬浮液、洗液B、洗液C和洗脱液，保护液由以下组分组成：四氢呋喃糠醇80％～85％，D‑α‑生育酚酸聚乙二醇1000琥珀酸10％～15％，乙酸四氢糖酯0.2％～0.3％，乙氧基黄叱精0.05％～0.1％，余量为水。本发明还提供了利用该试剂盒进行游离DNA亚硫酸氢盐转化及纯化DNA的方法。本发明对亚硫酸盐转化方法进行了大幅技术改进，使ctDNA转化能够在温和条件下(70～80℃)条件下快速(40～60分钟)完成，能够稳定体系pH并防止ctDNA降解，能够快速得到高转化率、高质量、高纯度的游离DNA，有利于甲基化研究的全自动化操作。

主权项

1.一种用于游离DNA亚硫酸氢盐转化的试剂盒，其特征在于：包括亚硫酸氢盐溶液、保护液、洗液A、磁珠悬浮液、洗液B、洗液C和洗脱液，其中，所述亚硫酸氢盐溶液，由以下组分组成，各组分按重量百分数计：亚硫酸氢铵50％，亚硫酸氢钠2％～6％，一水合亚硫酸铵1％～3％，TritionX‑100 0.5％～1％，余量为水，pH值在5.3～5.6；所述保护液，由以下组分组成，各组分按重量百分数计：四氢呋喃糠醇80％～85％，D‑α‑生育酚酸聚乙二醇1000琥珀酸10％～15％，乙酸四氢糖酯0.2％～0.3％，乙氧基黄叱精0.05％～0.1％，余量为水；所述洗液A，由以下组分组成，各组分按重量百分数计：异硫氰酸胍20％～25％，TritionX‑100 10％～15％，1,2‑丙二醇3％～5％，乙二醇乙醚乙酸酯0.2％～0.4％，乙醇35％～37％，三羟甲基氨基甲烷0.5％～1％，余量为水；所述磁珠悬浮液，为50mg/ml的纳米磁性颗粒的水悬浮液；所述磁性颗粒为超顺四氧化三铁颗粒或超顺三氧化二铁颗粒，且外表由表面修饰有羟基的二氧化硅包被；所述洗液B，由氢氧化钠、乙醇和水组成，其中，氢氧化钠的浓度为0.3mol/L，乙醇的浓度为75％～80％；所述洗液C为75％～80％的乙醇溶液；所述洗脱液为10mM的Tris‑HCl缓冲液，pH 8.0。