[发明专利]环状DNA的复制或扩增方法在审

专利信息
申请号: 201880018564.4 申请日: 2018-02-28
公开(公告)号: CN110446783A 公开(公告)日: 2019-11-12
发明(设计)人: 末次正幸;奈良圣亚 申请(专利权)人: 奥利希罗基因组学有限公司
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10
代理公司: 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 代理人: 何杨
地址: 日本*** 国省代码: 日本;JP
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摘要: 提供一种可以在无细胞系统中复制或扩增环状DNA、特别是长链环状DNA的方法。具体而言,提供在使用以下的酶组:(1)催化环状DNA的复制的第一酶组;(2)催化冈崎片段连接反应而合成形成环连体的2个姊妹环状DNA的第二酶组;和(3)催化2个姊妹环状DNA的分离反应的第三酶组复制或扩增具有复制起始序列(origin of chromosome(oriC))的环状DNA时抑制作为副产物的DNA多聚体的生成的方法。另外,还提供包含利用转座子向环状DNA中导入oriC的步骤的方法。
搜索关键词: 环状DNA 扩增 催化 复制 复制起始序列 无细胞系统 片段连接 多聚体 副产物 转座子 组复制 连体 链环 合成
【主权项】:
1.一种无细胞系统中的环状DNA的复制方法,其包含以下的工序:工序(1):形成成为模板的环状DNA与反应液的反应混合物,所述反应液包含以下组分:催化环状DNA的复制的第一酶组、催化冈崎片段连接反应而合成形成环连体的2个姊妹环状DNA的第二酶组、和催化2个姊妹环状DNA的分离反应的第三酶组;和工序(2):使工序(1)中形成的反应混合物进行反应;其中,该环状DNA包含能够与具有DnaA活性的酶结合的复制起始序列(origin of chromosome(oriC))、并且还包含分别相对于oriC向外插入的1对ter序列和/或被DNA多聚体分离酶识别的碱基序列,其中,在该环状DNA具有ter序列的情况下,所述工序(1)的反应液还包含具有结合于ter序列而抑制复制的活性的蛋白质,并且,在该环状DNA具有DNA多聚体分离酶识别的碱基序列的情况下,所述工序(1)的反应液还包含DNA多聚体分离酶。
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