[发明专利]一种马蹄莲块茎组织培养方法

摘要

本发明公开了一种马蹄莲块茎组织培养方法，该方法为：通过消毒清洗、叶片愈伤组织诱导、对块茎愈伤愈伤组织在MS培养基进行诱导、对块茎愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化诱导和分化苗生根诱导及其移栽炼苗获得马蹄莲，本发明筛选出愈伤组织基本培养基为MS；MS+6‑BA（2mg/L）+KT（1.0mg/L）+NAA(0.5mg/L)+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）为最佳愈伤组织诱导培养基；愈伤组织在MS+6‑BA（2.0mg/L）+NAA(0.2mg/L)+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）中分化达20株以上；分化苗在1/2MS+NAA（0.5mg/L）+AC（0.5g/L）+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）中生根率达100%且在草炭土：腐殖土：蛭石=2:2:1中成活率高达95%。

主权项

1.一种马蹄莲块茎组织培养方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）戴上手套取出马蹄莲球茎，去掉叶柄后将球茎在自来水下用毛刷刷洗干净，然后用手术刀片清理掉球茎上的表皮及其芽眼上的泥土；然后将直径大于5cm的球茎切成两半，再用多菌灵处理30min后，取出块茎并加入3滴吐温‑20在自来水下冲洗30min，将其转移至无菌操作台上进行消毒，消毒完毕后切掉块茎与消毒液接触部分切成约1cm×1cm×1cm的方块，接种至培养基中；（2）基本培养基的筛选：将块茎接种至MS培养基中，基本培养基中添加6‑BA+NAA+琼脂+蔗糖，对块茎愈伤愈伤组织进行诱导，培养条件为：25±2℃，暗培养条件下；（3）对块茎愈伤组织的诱导：以MS为基本培养基，培养基中添加6‑BA、KT和NAA，培养条件为:温度为25±2℃，暗培养；（4）愈伤组织的分化诱导：将白色、乳白色愈伤组织或者有芽点的愈伤组织转接至原培养基中继代1‑2次，使其愈伤增殖，然后转至分化培养基中进行分化，以MS为基本培养基，培养基中添加6‑BA与NAA，培养条件：光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃；（5）分化苗生根诱导及其移栽炼苗：当分化苗长势良好，叶片翠绿，高长至1.8‑2.5cm，即将其切下接种至诱导生根培养基中，培养基中添加生长素NAA、活性炭AC，培养条件：光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃，移栽炼苗，在驯苗过程中使用草炭土：腐殖土：珍珠岩=2:2:1生根苗。