[发明专利]一种马蹄莲块茎组织培养方法

说明书

本发明公开了一种马蹄莲块茎组织培养方法，该方法为：通过消毒清洗、叶片愈伤组织诱导、对块茎愈伤愈伤组织在MS培养基进行诱导、对块茎愈伤组织的诱导、愈伤组织的分化诱导和分化苗生根诱导及其移栽炼苗获得马蹄莲，本发明筛选出愈伤组织基本培养基为MS；MS+6‑BA（2mg/L）+KT（1.0mg/L）+NAA(0.5mg/L)+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）为最佳愈伤组织诱导培养基；愈伤组织在MS+6‑BA（2.0mg/L）+NAA(0.2mg/L)+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）中分化达20株以上；分化苗在1/2MS+NAA（0.5mg/L）+AC（0.5g/L）+琼脂（6g/L）+蔗糖（30g/L）中生根率达100%且在草炭土：腐殖土：蛭石=2:2:1中成活率高达95%。

技术领域

本发明涉及一种马蹄莲块茎组织培养方法，属于马蹄莲块茎组织技术领域。

背景技术

马蹄莲(Zantedeschia aethiopica(L.)Spreng.)，是天南星科马蹄莲属球根植物，因色彩鲜艳，花色多样且可作为鲜切花；深受广大市民的欢迎喜爱，具有很大的发展潜力。马蹄莲通常采用块茎分割繁殖，其繁殖系数低且速度慢，本研究通过植物组织培养技术对马蹄莲进行扩繁，加快了种球繁殖时间，获得大量性状一致、稳定的小球茎。迄今为止，研究马蹄莲快繁外植体的污染问题是一大难题，为了降低感染率，通常的方法是将球茎在室内进行培养一段时间、增加消毒时间、增加消毒剂浓度或向培养基中加入抗生素等；然而研究报道通常以芽眼作为外植体，通过其诱导愈伤组织、愈伤组织增殖分化、分化苗的生根和移栽炼苗途径进行扩繁。但并未记载对马蹄莲块茎的培养技术。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种马蹄莲块茎组织培养方法，以解决上述现有技术中存在的问题。

本发明采取的技术方案为：一种马蹄莲块茎组织培养方法，该方法包括以下步骤：

(1)戴上手套取出马蹄莲球茎，去掉叶柄后将球茎在自来水下用毛刷刷洗干净，然后用手术刀片清理掉球茎上的表皮及其芽眼上的泥土；然后将直径大于5cm的球茎切成两半，再用多菌灵处理30min后，取出块茎并加入3滴吐温-20在自来水下冲洗30min，将其转移至无菌操作台上进行消毒，消毒完毕后切掉块茎与消毒液接触部分切成约1cm×1cm×1cm的方块，接种至培养基中；

(2)基本培养基选择：将块茎接种至MS培养基中，基本培养基中添加6-BA+NAA+琼脂+蔗糖，对块茎愈伤愈伤组织进行诱导，培养条件为：25±2℃，暗培养条件下；

(3)对块茎愈伤组织的诱导：以MS为基本培养基，培养基中添加6-BA、KT和NAA，培养条件为:温度为25±2℃，暗培养；

(4)愈伤组织的分化诱导：将白色、乳白色愈伤组织或者有芽点的愈伤组织转接至原培养基中继代1-2次，使其愈伤增殖，然后转至分化培养基中进行分化，以MS为基本培养基，培养基中添加6-BA与NAA，培养条件：光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃；

(5)分化苗生根诱导及其移栽炼苗：当分化苗长势良好，叶片翠绿，高长至1.8-2.5cm，即将其切下接种至诱导生根培养基中，培养基中添加生长素NAA、活性炭AC，培养条件：光照强度2000lux，16h/d，温度为25±2℃，移栽炼苗，在驯苗过程中使用草炭土：腐殖土：珍珠岩＝2:2:1生根苗。

优选的，上述步骤(1)中消毒方法为：先用75％乙醇处理30s，无菌水清洗2遍；0.1％升汞5min，无菌水清洗2遍；再用2％NaClO分别处理10min，无菌水清洗4遍。

优选的，上述步骤(2)中6-BA、NAA、琼脂和蔗糖的量分别为1.5mg/L、0.5mg/L、6g/L和30g/L。

优选的，上述步骤(3)中6-BA、KT和NAA的量分别为2mg/L、1mg/L和0.5g/L。