[发明专利]一种自体外周血淋巴细胞的培养方法在审
| 申请号： | 201811639114.5 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109593713A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 周海军;吴家波 | 申请（专利权）人： | 广州和能生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 深圳市合道英联专利事务所(普通合伙) 44309 | 代理人： | 廉红果 |
| 地址： | 510000 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，具体包括以下步骤：(1)从外周血中分离外周血单个核细胞加入适量无血清细胞培养液中，并加入浓度为1000‑2000U/ml的干扰素‑γ，置于培养箱静置培养3天；(2)将步骤(1)中培养的单个核细胞转移至含细胞表面分子3单克隆抗体与细胞表面分子16单克隆抗体的培养瓶中，并加入浓度为1000‑2000U/ml的干扰素‑2，静置培养3天；(3)往步骤(2)中补加500‑1000mL的细胞培养液，加入1000‑2000U/ml的干扰素‑2，静置培养3天；(4)往步骤(3)中继续补加500‑1000mL的细胞培养液，置于培养箱静置培养3天，重复此步骤2‑3次，制得自体外周淋巴细胞。本发明可以培养高扩增率以及高活性的CIK细胞，进而很好的应用至抗肿瘤过继细胞免疫治疗中。 | ||
| 搜索关键词： | 静置培养 淋巴细胞 干扰素 细胞培养液 细胞表面分子 单克隆抗体 自体外周血 培养箱 补加 外周血单个核细胞 细胞免疫治疗 单个核细胞 高活性 抗肿瘤 培养瓶 外周血 无血清 扩增 外周 自体 重复 应用 | ||
【主权项】：
1.一种自体外周血淋巴细胞的培养方法，其特征在于：具体包括以下步骤：(1)首先，从外周血中分离外周血单个核细胞，然后，按照密度1×106加入适量无血清细胞培养液中，并加入浓度为1000‑2000U/ml的干扰素‑γ，置于培养箱静置培养3天，得到初次培养液；(2)首先，将细胞表面分子3单克隆抗体与细胞表面分子16单克隆抗体进行预先包被，然后将步骤(1)中培养的单个核细胞转移至含细胞表面分子3单克隆抗体与细胞表面分子16单克隆抗体的培养瓶中，等倍补加无血清细胞培养液，并加入浓度为1000‑2000U/ml的干扰素‑2，置于培养箱静置培养3天，得到二次培养液；(3)首先，将步骤(2)所得二次培养液补加500‑1000mL的细胞培养液，然后加入1000‑2000U/ml的干扰素‑2，置于培养箱静置培养3天，制得三次培养液；(4)首先，将步骤(3)所得三次培养液继续补加500‑1000mL的细胞培养液，置于培养箱静置培养3天，重复此步骤2‑3次，制得自体外周淋巴细胞。
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