[发明专利]乳品食源性致病菌快速检测方法在审
| 申请号： | 201811627939.5 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109457014A | 公开（公告）日： | 2019-03-12 |
| 发明（设计）人： | 惠建明;付林;范益华 | 申请（专利权）人： | 新希望双喜乳业（苏州）有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 | 代理人： | 韩飞 |
| 地址： | 215000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种乳品食源性致病菌快速检测方法，包括以下步骤：1)受检乳品的预处理：向受检乳品中加入碘化丙啶并置于卤素灯下曝光；2)受检乳品的DNA提取；3)LAMP扩增反应：将步骤2)中提取的DNA作为模板进行扩增反应；4)鉴定：扩增反应结束后加入中性红染料，振荡摇匀后观察颜色变化；所述食源性致病菌为沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌。本发明采用PI染料联用LAMP扩增技术，检测速度快，且实现死菌活菌的特异性检测，并利用LAMP扩增过程中释放的焦磷酸改变溶液pH特点，以中性红为底物实现红黄色检测，提高了传统羟基萘酚蓝(深蓝变浅蓝)底物视觉差异低的问题，更加容易判定扩增反应结果。 | ||
| 搜索关键词： | 食源性致病菌 扩增反应 快速检测 底物 单核细胞增生李斯特氏菌 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 预处理 特异性检测 中性红染料 碘化丙啶 视觉差异 颜色变化 羟基萘酚 红黄色 焦磷酸 卤素灯 溶液pH 中性红 检测 染料 振荡 活菌 联用 摇匀 判定 曝光 释放 观察 | ||
【主权项】：
1.一种乳品食源性致病菌快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)受检乳品的预处理：向受检乳品中加入碘化丙啶并置于卤素灯下曝光；2)受检乳品的DNA提取：向步骤1)中经预处理后的受检乳品加入溶剂，混合均匀后离心并弃去上清液，再向剩余沉淀中加入TE裂解液、SD溶液及氯仿后震荡摇匀并离心得到上清液，最后向上清液加入乙酸铵溶液、无水乙醇和糖原并混匀离心后弃去上清液，得到沉淀即为基因组DNA，可直接作为核酸扩增反应的模板；3)LAMP扩增反应：将步骤2)中提取的DNA作为模板，利用在线LAMP引物设计软件Primer Explorer V4进行分析并针对所述食源性致病菌的靶标核酸设计特异引物组，在LAMP反应体系下进行扩增反应；4)鉴定：扩增反应结束后加入中性红染料，振荡摇匀后观察颜色变化；所述食源性致病菌为沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌。
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