[发明专利]一种那屈肝素钙制备方法

摘要

本发明公开了一种那屈肝素钙制备方法，它是以肝素钠为原料，经降解、还原、去除金属离子、转钙、纳滤、氧化、超滤、纳滤、膜过滤、冷冻干燥等工序制得那屈肝素钙。本发明制备的那屈肝素钙原料灌装成的注射液，溶液颜色发黄的情况得到明显改善，降低了那屈肝素钙注射液发浑及pH降低的风险，保证了那屈肝素钙原料制备的注射液pH的可控性。本发明制备的原料灌装成注射液后，经6个月加速稳定性试验和24个月长期稳定性试验考察，稳定性较好，检测结果均符合法规标准，保证了临床使用时产品安全性、较高的生物活性和较好的产品质量，降低了不良反应发生的风险。本发明制备的那屈肝素钙灌装的注射液具有颜色、澄清度及pH值等稳定性良好的特点，工艺简单，适用于商业化生产，社会经济效益显著。

主权项

1.一种那屈肝素钙制备方法，其特征在于包括以下步骤：a、降解调节10～20%（W/V）肝素钠水溶液温度至18～20℃，用20%（V/V）盐酸溶液调pH值为2.0～3.5后，称取肝素钠重量2.5～3.5%（W/W）的亚硝酸钠后，配制成15～25%（W/V）的亚硝酸钠水溶液，然后在50～60min内匀速加入到上述肝素钠水溶液中，再保温18～20℃，搅拌2h后得到肝素钠降解液；b、还原用3M氢氧化钠溶液调上述肝素钠降解液pH值至8.5～9.5后，在室温下加入上述亚硝酸钠重量1/3的硼氢化钠后在搅拌状态下进行还原反应，还原反应15～24h后用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至4.0～4.5，再搅拌30min后用3M氢氧化钠溶液调pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；c、EDTA二钠去金属离子将上述所得沉淀物加纯化水溶解成10～20%（W/V）的药液，在药液中加入0.5～2.0%（W/V）氯化钠搅拌溶解后，用3M氢氧化钠溶液调pH为7.0～8.0，然后加入0.5～1.5%（W/V）的EDTA二钠，搅拌2h后再用20%（V/V）盐酸溶液调pH值至6.5～7.0，再加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；d、转钙、纳滤将步骤c所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用阴离子交换树脂进行转钙，氯化钙溶液进行洗脱，再将洗脱液进行纳滤浓缩至8～12%（W/V）的浓缩液，将所述浓缩液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至6.5～7.0后，加入3～4体积倍量的乙醇，静置沉淀12～16h后分离出上清液，得到沉淀物；e、氧化、超滤将步骤d所得沉淀物加纯化水溶解成8～12%（W/V）的药液后，用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至9.5～10.5，然后在25～35℃下加入0.5～1.0%（V/V）的过氧化氢，搅拌反应6～12h后加入0.5～2.0%（W/V）氯化钙搅拌溶解，再用20%（V/V）盐酸溶液调药液pH值至6.5～7.0，然后加入3～4体积倍量的乙醇进行沉淀，静置12～16h后分离出上清液，再向沉淀物中加纯化水制成浓度为8～12%（W/V）的溶液后，用1000‑3000Da膜循环进行超滤，收集截留液；f、二次纳滤向步骤e所得超滤截留液中补加纯化水制成15～20%（W/V）药液后，进行二次纳滤，在二次纳滤过程中边纳滤边补加纯化水，保持药液体积不变，当滤出液体积为药液体积的5～8倍时得到那屈肝素钙纳滤液；g、调pH值，膜过滤，冷冻干燥将步骤f所得那屈肝素钙纳滤液用过滤后的饱和氢氧化钙溶液调pH值至8.5～9.0时，经膜过滤进入洁净区，再将过滤后的药液装盘冷冻干燥后，得到那屈肝素钙原料。