[发明专利]一种通用型猪丁型冠状病毒巢式RT-PCR检测方法

摘要

本发明提供了用于检测猪丁型冠状病毒的巢氏RT‑PCR引物、检测方法及试剂盒。所述巢氏RT‑PCR引物是根据检测猪丁型冠状病毒的高度保守的特异性序列设计的两对引物。所述检测方法包括：提取样本RNA；以所得样本RNA为模板，利用所述引物进行RT‑PCR反应；反应产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。所述试剂盒包括引物、扩增试剂、阳性对照和阴性对照。本发明提供的技术方案特异性强、灵敏度高、抗干扰性能好，且可靠性强，克服了普通检测方法灵敏度低，特异性差等问题，而且与现有的核酸杂交、基因芯片等检测方法相比成本较低，检测周期短，实用性强。

主权项

1.一种猪丁型冠状病毒巢式RT‑PCR特异性引物，其特征在于，所述引物根据检测猪丁型冠状病毒的高度保守的特异性序列设计两对特异性引物，所述两对引物，分别为一对外侧引物PDCoV‑O‑F、PDCoV‑O‑R和一对内侧引物PDCoV‑I‑F、PDCoV‑I‑R，具体为：PDCoV‑O‑F：5'‑CAGGTCCCAGAGGAAATCTTA‑3'(SEQ ID NO.1)；PDCoV‑O‑R：5'‑TTTGGTAGGTGGCTCATAGGT‑3'(SEQ ID NO.2)；PDCoV‑I‑F：5'‑GAAGACCTCAGGAGCGTGGAA‑3'(SEQ ID NO.3)；PDCoV‑I‑R：5'‑TGAGTAGGAGAAGGTAAGGGTGA‑3'(SEQ ID NO.4)。