[发明专利]多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法

摘要

本发明公开了多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法，包括多种氨基酸和肉碱释放剂检测的前处理方法与多种氨基酸和肉碱释放剂检测的质谱分析方法，多种氨基酸和肉碱释放剂检测的前处理方法，本发明涉及生物成份检测技术领域。该多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法，可实现在采用质谱技术进行生物病理检测时，避免样本分类混乱的情况发生，大大增强了前处理效果，保证了后期的质谱检测精度，同时可大大提高质谱设备的分析精确度，防止得到的质谱图像模糊不够准确，很好的实现了通过对质谱图进行平滑算法处理，使质谱图能够清晰的体现出来，从而大大方便了相关人员的生物成份质谱检测工作。

主权项

1.多种氨基酸和肉碱释放剂检测前处理方法和质谱分析方法，包括多种氨基酸和肉碱释放剂检测的前处理方法与多种氨基酸和肉碱释放剂检测的质谱分析方法，其特征在于：所述多种氨基酸和肉碱释放剂检测的前处理方法，具体包括以下步骤：S1、提取液的制备和标记：首先将经确认的待测样本、释放剂NBS－X1、释放剂NBS－F3、内标液和质控品取出放置23‑27℃室温内，并混匀，然后取内标液1ml，加入99ml释放剂NBS－X1混匀，即可得到得提取液，之后将96孔蛋白过滤板和平底板A排朝上，在蛋白过滤板靠近H排的侧面及平底板的背面用记号笔标注检测日期及板号，并在平底板近H排的侧面用记号笔划线做标记；S2、打孔取样提取：用Φ3.0mm打孔器在样本干血片的血斑中心上打孔取样，用一次性注射针头将3mm血斑放置于蛋白过滤板底部，按空白样、质控品Z1和Z2、待测样顺序依次进行放置，然后在蛋白过滤板内的质控样和待测样中分别加入提取液100μl，之后用封板塑料膜密封蛋白过滤板后，放入微孔板恒温振荡器中在室温和500rpm条件下，振摇30min；S3、离心过滤和氮吹：将密封的蛋白过滤板与下层匹配的平底板一起放置在96孔板离心机中，对称摆放，在4000rpm条件下，离心5min，然后打开氮气瓶阀，调节气瓶分压阀至分压在0.3‑0.4MPa，将氮吹仪吹气口面旋转90°，调节氮吹仪压力阀使转子上缘至刻度为40LPM，将平底板平稳放在氮吹仪台面上，将氮吹仪吹气口面旋转至正对平底板，缓慢调节使氮吹仪台面上升至氮吹仪出气口略微伸入平底板，10min后略向上调整氮吹仪台面，20min后将平底板取出，用手电筒光从平底板底部照射，仔细观察平底板内有无液体，致平底孔板内无液体后停止氮吹；S4、衍生化反应：从冰箱中取出释放剂NBS－Z2，混匀，在平底板内的质控样和待测样中分别加入50μl释放剂NBS－Z2，在平底板上用封板铝膜密封后，放入微孔板恒温振荡器在60℃和600rpm条件下，振摇衍生30min；S5、氮吹、复溶和离心：揭去封板铝膜，设置氮吹仪温度至60℃，打开氮气瓶阀，调节氮吹仪分压表压力调至0.02Mpa，将平底板平稳放在氮吹仪台面上，缓慢调节使氮吹仪出气口略微深入平底板，15min后将平底板取出，用手电筒光从平底板底部照射，仔细观察平底板内有无液体，至平底板内无水渍后停止氮吹，在平底板内的空白样、质控样和待测样中分别加入100μl释放剂NBS－F3，用锡箔纸密封后放入微孔板恒温振荡器在室温和500rpm的条件下，振摇10min，之后将密封的平底板放置在96孔板离心机中，对称摆放，在4000rpm条件下，离心5min，即可完成检测前处理；S6、测试后整理：将测试后剩余待测样装入自封袋内并在袋外贴标签注明检测项目、检测日期及检品数量后放入冰箱冷藏保存，将测试后剩余试剂及质控品放回冰箱冷藏保存，超声清洗氮吹仪针头，最后将移液枪挂于移液器架，补齐枪头盒内的枪头，清理实验台桌面。