[发明专利]一种检测3型人腺病毒的RPA方法、其专用引物和探针及用途在审
| 申请号： | 201811397254.6 | 申请日： | 2018-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN109504804A | 公开（公告）日： | 2019-03-22 |
| 发明（设计）人： | 李越希;齐永;李晓玲;李佳萌;饶继先;沈万鹏;王长军;曾雯雯;刘苏云 | 申请（专利权）人： | 李越希 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京品智知识产权代理事务所(普通合伙) 32310 | 代理人： | 奚晓宁;杨陈庆 |
| 地址： | 210002 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明提供了用于检测3型人腺病毒的RPA检测方法，其专用引物、探针及其在3型人腺病毒检测中的用途。所述检测方法、其专用引物和探针是基于3型人腺病毒hexon基因保守序列设计的，具有SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的寡核苷酸序列。本发明将新型恒温扩增技术RPA应用于3型人腺病毒的检测中，该方法模拟体内DNA复制的酶反应过程，依赖特定的酶和蛋白组合（重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶）对DNA模板进行扩增，可在37℃的恒温下实现特定核酸序列的扩增，扩增产物可通过侧向层析试纸条实现可视化判别。本发明建立的检测方法灵敏度高，检测限可达101拷贝/反应；特异性强，与其他病原体无交叉反应；检测速度快，反应时间仅需20 min；操作简便，适合现场检测。 | ||
| 搜索关键词： | 人腺病毒 检测 专用引物 扩增 探针 寡核苷酸序列 基因保守序列 侧向层析 核酸序列 交叉反应 结合蛋白 扩增产物 特异性强 现场检测 新型恒温 病原体 可视化 灵敏度 酶反应 试纸条 种检测 重组酶 单链 拷贝 蛋白 体内 应用 | ||
【主权项】：
1.一种用于检测3型人腺病毒的RPA专用引物，是根据3型人腺病毒hexon基因保守序列设计的，所述3型人腺病毒hexon基因保守序列具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；SEQ ID NO.1：ATGGCCACCCCATCGATGATGCCCCAATGGGCATACATGCACATCGCCGGACAGGATGCTTCGGAGTACCTCAGTCCGGGTCTGGTGCAGTTCGCCCGTGCAACAGACACCTACTTCAGTATGGGGAACAAATTTAGAAACCCCACAGTGGCGCCCACCCACGATGTGACCACCGACCGTAGCCAGCGCCTGATGCTGCGCTTCGTGCCCGTTGACCGGGAAGACAATACCTACTCTTACAAAGTTCGCTACACGCTGGCTGTAGGCGACAACAGAGTGCTTGACATGGCCAGCACATTCTTTGACATTCGGGGGGTGCTTGATAGAGGTCCTAGCTTCAAGCCATATTCCGGCACAGCTTACAATTCACTCGCTCCTAAGGGCGCGCCCAATACATCTCAGTGGATAGTTACAACAAATGGGGACAATGCAGTAACTACCACCACAAACACATTTGGCATTGCTTCCATGAAGGGAGACAATATTACTAAAGAAGGTTTGCAAATTGGGAAAGACATTACCACTACTGAAGGAGAAGAAAAGCCCATTTATGCCGATAAAACATATCAGCCAGAGCCTCAAGTTGGAGAAGAATCATGGACTGATACTGATGGAACAAATGAAAAGTTTGGTGGAAGAGCCCTTAAACCAGCTACCAACATGAAGCCATGCTACGGGTCTTTTGCAAGACCTACAAACATAAAAGGGGGCCAAGCTAAAAACAGAAAAGTAAAACCAACAACCGAAGGAGGGGTTGAAACTGAGGAACCAGATATTGATATGGAATTTTTCGATGGTAGAGATGCTGTTGCAGGAGCTTTAGCGCCTGAAATTGTGCTTTATACGGAAAATGTAAATTTGGAAACTCCAGACAGTCATGTGGTATATAAACCAGAAACGTCTAATAACTCTCATGCAAATTTGGGTCAACAAGCCATGCCTAACAGACCCAATTACATTGGCTTCAGGGATAACTTCGTAGGCCTAATGTACTACAACAGTACTGGAAATATGGGAGTTTTGGCTGGCCAAGCATCACAACTGAATGCAGTGGTTGACTTGCAGGACAGAAATACTGAACTGTCATATCAGCTTTTGCTTGATTCTCTGGGAGACAGAACCAGATACTTCAGCATGTGGAATCAGGCTGTGGACAGTTACGATCCCGATGTTCGCATTATTGAAAATCATGGCATCGAGGATGAACTGCCTAATTACTGTTTTCCTCTGAATGGCATAGGACCAGGGCACACATATCAAGGCATTAAAGTTAAAACCGATGACACTAATGGATGGGAAAAAGATGCTAATGTTGCTCCAGCTAATGAAATAACCATAGGCAACAACCTGGCTATGGAAATTAATATCCAAGCTAACCTTTGGAGAAGTTTTCTGTACTCTAATGTGGCTTTGTACCTTCCAGATGTTTACAAGTACACGCCACCTAACATTACTTTGCCCACTAACACCAACACCTATGAGTACATGAACGGGCGAGTGGTATCCCCATCCCTGGTTGATTCATACATCAACATTGGCGCCAGGTGGTCTCTTGACCCAATGGACAATGTGAATCCATTCAACCACCACCGCAATGCTGGTCTGCGCTACAGGTCCATGCTTCTGGGAAATGGTCGTTATGTGCCTTTCCACATACAAGTGCCTCAGAAATTCTTTGCTGTCAAGAACCTACTTCTTCTACCTGGCTCCTACACCTACGAGTGGAACTTCCGAAAGGATGTGAACATGGTCCTGCAAAGTTCCCTTGGAAATGACCTCAGAACGGATGGTGCTACCATAAGTTTCACCAGCATCAATCTCTATGCCACCTTCTTCCCCATGGCTCACAACACAGCTTCCACCCTTGAAGCCATGCTGCGCAACGATACCAATGATCAGTCATTTAACGACTACCTCTCTGCAGCTAACATGCTTTACCCCATTCCTGCCAATGCAACCAACATTCCAATTTCCATCCCATCTCGCAACTGGGCAGCCTTCAGGGGCTGGTCCTTCACCAGACTCAAAACCAAGGAGACTCCATCTCTTGGATCAGGGTTCGATCCCTACTTCGTATATTCTGGATCTATTCCCTACCTGGATGGCACCTTTTACCTTAACCACACTTTCAAGAAGGTCTCCATCATGTTTGACTCCTCAGTCAGCTGGCCTGGCAATGACAGGCTGTTGAGTCCAAATGAGTTTGAAATCAAGCGCACTGTGGACGGGGAAGGATACAACGTGGCACAATGCAACATGACCAAAGACTGGTTCCTGGTTCAGATGCTTGCCAATTACAACATTGGCTACCAGGGCTTTTACATCCCTGAGGGATACAAGGATCGCATGTACTCCTTTTTCAGAAACTTCCAGCCTATGAGCAGGCAGGTGGTTGATGAGGTTAATTACACTGACTACAAAGCCGTCACCTTACCATACCAACACAACAACTCTGGCTTTGTAGGGTACCTTGCACCTACTATGAGACAAGGGGAACCTTACCCAGCCAATTATCCATACCCGCTCATCGGAACTACTGCCGTTAAGAGTGTCACCCAGAAAAAGTTCCTGTGCGACAGGACCATGTGGCGCATTCCCTTCTCCAGCAACTTCATGTCCATGGGGGCCCTTACCGACCTGGGACAGAACATGCTCTATGCCAACTCAGCCCATGCGCTGGACATGACTTTTGAGGTGGATCCCATGGATGAGCCCACCCTGCTTTATCTTCTTTTCGAAGTCTTCGACGTGGTCAGAGTGCACCAGCCACACCGCGGCGTCATCGAGGCCGTCTACCTGCGCACACCGTTCTCGGCCGGCAACGCCACCACATAA。
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