[发明专利]一种甘油激酶的制备方法在审
| 申请号： | 201811346370.5 | 申请日： | 2018-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN109207453A | 公开（公告）日： | 2019-01-15 |
| 发明（设计）人： | 谢渊;罗漫杰;杨广宇 | 申请（专利权）人： | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/12 | 分类号： | C12N9/12 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种甘油激酶的制备方法，具体包括以下步骤：S1、发酵罐培养：首先将甘油保存菌接种于试管LB培养基中，在37℃，200r/min摇床培养10h‑12h；S2、按2％接种量再接种于摇瓶发酵培养基中，同样条件培养10h‑12h作为种子菌种；S3、发酵罐培养至葡萄糖被消耗完全，加入终浓度达6.0g/L乳糖开始诱导发酵。本发明涉及医疗试剂技术领域。该甘油激酶的制备方法，可实现很好的使自然菌存在产酶特性更加稳定，且大大增强甘油激酶的活性，实现了通过高密度乳糖诱导表达重组甘油激酶r‑GK工程菌的发酵培养条件、酶的纯化工艺的建立以及质控检测，取得的这些研究结果将为此酶的开发和利用莫定坚实的工作基础。 | ||
| 搜索关键词： | 甘油激酶 制备 发酵罐培养 接种 摇瓶发酵培养基 乳糖 发酵培养条件 葡萄糖 工作基础 乳糖诱导 条件培养 摇床培养 医疗试剂 种子菌种 工程菌 接种量 自然菌 甘油 试管 产酶 质控 发酵 诱导 消耗 保存 检测 开发 研究 | ||
【主权项】：
1.一种甘油激酶的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1、发酵罐培养：首先将甘油保存菌接种于试管LB培养基中，在37℃，200r/min摇床培养10h‑12h；S2、按2％接种量再接种于摇瓶发酵培养基中，同样条件培养10h‑12h作为种子菌种；S3、发酵培养基装入300L发酵罐中，121℃灭菌30min，按2％接种量接入摇瓶培养的种子菌种液，均匀搅拌，溶氧保持20％进行发酵，间隔2‑3h取样分析葡萄糖消耗量、生物量和pH变化；S4、经检测葡萄糖被消耗至接近0开始诱导发酵，将发酵罐温度降到25℃，加入乳糖使终浓度达6.0g/L开始诱导发酵，间隔2‑3h取样分析，当生物量基本恒定时停止发酵，从而完成了对甘油激酶的制备。
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