[发明专利]一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法

摘要

本发明公开了一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法，涉及纳米科学、生物免疫技术、电化学传感等领域。本发明利用银纳米颗粒和普鲁士蓝优异的催化性能，制备了银纳米颗粒掺杂的负载普鲁士蓝的聚多巴胺纳米复合物作为电化学生物传感器标记物。通过负载银纳米颗粒的聚多巴胺纳米微球进行修饰，实现了生物分子的固定。银纳米颗粒和普鲁士蓝对过氧化氢底液的协同催化作用进一步提高了对过氧化氢的催化能力。普鲁士蓝不仅是过氧化氢最有利的还原电催化剂，且具有优异的储存稳定性。该标记物可以适用于多种电化学生物传感器的制备，在科研和临床中具有广泛的应用前景。

主权项

1.一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法，包括以下步骤：（1）聚多巴胺纳米微球的制备：将100 mg盐酸多巴胺加入到100 mL pH为 8.8的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和50 mL异丙醇形成的混合溶液中，然后将混合溶液搅拌24小时后，得到深棕色的悬浮液，通过9000转离心20分钟后收集产物，并将产物用超纯水洗涤五次以除去未反应的物质，最后将其分散到5 mL的超纯水中，得到聚多巴胺纳米微球水溶液；（2）银纳米颗粒的制备：将45 mg硝酸银溶解在200 mL超纯水中，加热至沸腾，随后将4 mL浓度为1％的柠檬酸钠溶液加入至上述沸腾溶液中，约1小时后，得到银纳米颗粒水溶液；（3）将2 mL上述银纳米颗粒水溶液加入到5 mL浓度为0.5 mg·mL‑1的聚多巴胺纳米微球水溶液中，振荡12小时，10000转离心得到银纳米颗粒掺杂的聚多巴胺纳米微球，将其分散到超纯水中得到银掺杂的聚多巴胺纳米微球水溶液；（4）将2 mL浓度为0.1 mol·L‑1的氯化钾溶液加入到5 mL浓度为0.5 mg·mL‑1的银掺杂的聚多巴胺纳米微球水溶液中，搅拌0.5小时后加入浓度为0.1 mol·L‑1的盐酸溶液调节溶液pH=1~2，继续向混合溶液中缓慢滴加2 mL 0.075 mol·L‑1的三氯化铁溶液、铁氰化钾溶液，搅拌1小时后再向溶液中加入2 mL 0.075 mol·L‑1的过氧化氢溶液，溶液出现蓝色1分钟后立刻以8000转离心，最后再用盐酸调节的pH=1~2的氯化钾溶液洗涤5~6次，得到负载有普鲁士蓝的聚多巴胺纳米复合物；（5）将上述所得的纳米复合物重新分散于5 mL、0.1 mol·L‑1、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，然后加入0.1 mL、10 µg·mL‑1的前列腺特异性抗原的抗体溶液，在4 °C下孵化2 h，离心，重新分散于5 mL、0.1 mol·L‑1、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，即制得一种电化学生物传感器标记物溶液。