[发明专利]一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法

权利要求书

1.一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法，包括以下步骤：

（1）聚多巴胺纳米微球的制备：将100 mg盐酸多巴胺加入到100 mL pH为 8.8的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和50 mL异丙醇形成的混合溶液中，然后将混合溶液搅拌24小时后，得到深棕色的悬浮液，通过9000转离心20分钟后收集产物，并将产物用超纯水洗涤五次以除去未反应的物质，最后将其分散到5 mL的超纯水中，得到聚多巴胺纳米微球水溶液；

（2）银纳米颗粒的制备：将45 mg硝酸银溶解在200 mL超纯水中，加热至沸腾，随后将4mL浓度为1％的柠檬酸钠溶液加入至上述沸腾溶液中，约1小时后，得到银纳米颗粒水溶液；

（3）将2 mL上述银纳米颗粒水溶液加入到5 mL浓度为0.5 mg·mL^-1的聚多巴胺纳米微球水溶液中，振荡12小时，10000转离心得到银纳米颗粒掺杂的聚多巴胺纳米微球，将其分散到超纯水中得到银掺杂的聚多巴胺纳米微球水溶液；

（4）将2 mL浓度为0.1 mol·L^-1的氯化钾溶液加入到5 mL浓度为0.5 mg·mL^-1的银掺杂的聚多巴胺纳米微球水溶液中，搅拌0.5小时后加入浓度为0.1 mol·L^-1的盐酸溶液调节溶液pH=1~2，继续向混合溶液中缓慢滴加2 mL 0.075 mol·L^-1的三氯化铁溶液、铁氰化钾溶液，搅拌1小时后再向溶液中加入2 mL 0.075 mol·L^-1的过氧化氢溶液，溶液出现蓝色1分钟后立刻以8000转离心，最后再用盐酸调节的pH=1~2的氯化钾溶液洗涤5~6次，得到负载有普鲁士蓝的聚多巴胺纳米复合物；

（5）将上述所得的纳米复合物重新分散于5 mL、0.1 mol·L^-1、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，然后加入0.1 mL、10 µg·mL^-1的前列腺特异性抗原的抗体溶液，在4 ^°C下孵化2 h，离心，重新分散于5 mL、0.1 mol·L^-1、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，即制得一种电化学生物传感器标记物溶液。

2.根据权利要求1所述的一种负载型普鲁士蓝电化学生物传感器标记物的制备方法，其特征在于，所述的标记物用于标记抗体构建夹心型电化学免疫传感器。